基因打靶技术是指利用外源性DNA与细胞DNA的相同或相似序列，在特定位点上进行替换，从而改变细胞遗传特性的方法。该技术可应用于解决人体对移植的猪器官产生的免疫排斥反应，即利用基因打靶技术对猪细胞ɑ—1，3半乳糖苷转移酶基因进行改造，以消除ɑ—1，3半乳糖苷转移酶引起的免疫排斥。其主要过程如下：
第二、三步示意图（6—10表示不同的基因片段）
第一步：从猪囊胚中分离出胚胎干细胞。
第二步：在与靶基因（需要改造的基因）相同的外源性DNA上，插入新霉素抗性基因，构建打靶载体。
第三步：打耙载体导入胚胎干细胞，与细胞DNA中的靶基因进行替换。
第四步：改造后的胚胎干细胞筛选、增殖等。
回答下列问题：
（1）上述改造过程中的靶基因是_______________，插入新霉素抗性基因的过程中需要用到的酶有___________，插入新霉素抗性基因的目的是____（答出2两点）。
（2）基因打靶技术依据的遗传学原理是_____________。
（3）除囊胚外，胚胎干细胞还可以来自于______阶段的胚胎和________。胚胎干细胞具有的显著特点是___________________。
鸡干扰素是一种具有高效和广谱抗病毒作用的细胞因子，广泛用于动物领域的抗病毒治疗。科研人员将鸡干扰素基因作为目的基因，构建基因表达载体，通过农杆菌介导法导入烟草，以获得抗病毒烟草。下图为科研人员制备能合成鸡干扰素的烟草愈伤组织细胞的流程，①～④表示相关的操作，两种限制酶的识别序列及切割位点如表所示。请回答下列问题：
（1）表格中的限制酶EcoRⅠ切割DNA分子后形成的黏性末端是_________________。
（2）步骤①是利用PCR技术扩增鸡干扰素基因，进行PCR的前提是___________。
（3）图中选用两种限制酶分别处理鸡干扰素基因和农杆菌Ti质粒，这样做的优点有_________。
（4）步骤②所构建的基因表达载体中启动子的作用是 ____________。
（5）步骤③中需先用____________处理农杆菌以便将基因表达载体导入细胞。
（6）步骤④中，科研人员提取愈伤组织细胞的RNA后，先通过逆转录获得DNA，再通过PCR扩增制备探针，若最终未能检测出干扰素基因，其可能原因是__________________。
基因敲除技术是指通过一定的途径使机体特定的基因失活或缺失的技术。通常意义上的基因敲除主要是应用DNA同源重组原理，用设计的同源片段替代靶基因片段，从而达到基因敲除的目的。基因敲除技术常用于建立某种特定基因缺失的生物模型。例如，基因敲除模式小鼠制备技术图解如下：
请回答：
（1）图中ES细胞（胚胎干细胞）存在囊胚的_______部位，它具有体积小、细胞核大、____________的特点。
（2）neor(新霉素抗性基因)位于基因表达载体的________和_________之间。
（3）转染ES细胞过程既可采用电穿孔法，亦可采用_________法。
（4）筛选中靶ES细胞需在动物细胞培养液中添加_____，图中字母X过程采用_____技术。
（5）嵌合鼠和白色纯合体小鼠交配产生的后代有___种表现型，其中黑色鼠是被破坏基因X的_____（填“纯合体”或“杂合体”）。
一个由英国伦敦帝国学院和芬兰图尔库大学的科学家组成的研究小组日前开发出一种通过大肠杆菌制造丙烷的新技术。科研人员要对大肠杆菌进行研究和利用，首先要纯化大肠杆菌，请结合所学知识，回答下列问题：
（1）纯化大肠杆菌首先需要制备牛肉膏蛋白胨固体培养基，其步骤是计算、称量、溶化、灭菌、______。对培养基进行灭菌的方法是_______________，检验培养基是否有杂菌污染的最有效方法是_________________。
（2）可以估算出样品中大肠杆菌数量的接种方法是_________，用该方法得到的结果一般比实际值_____（填“偏大”或“偏小”）。
（3）某实验小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养。结果发现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因 是振荡培养能提高培养液中_____的含量和营养物质的利用率。使用过的培养基及培养物必须经过_______后才能丢弃，以防止培养物扩散。
（4）如果要检测食品中是否含有大肠杆菌，需要在培养基中加入_______（填物质），观察是否出现_____（填颜色）的菌落。
毛霉型豆豉是以大豆为原料，接种毛霉，经发酵而成的一种调味副食品。因其营养丰富，易于消化吸收，且味道鲜美，广受人们喜爱。回答下列问题：
（1）毛霉型豆豉发酵的最适温度为_________，毛霉和醋酸菌在结构上的最大区别是后者没有_________。
（2）毛霉在豆豉发酵过程中分泌大量的酶来分解大豆中的大分子有机物，若要将这些酶进行分离，可采用的方法有______________（填2种）。为了使分离出的酶可重复利用，常采用固定化酶技术将酶固定化，固定化酶一般不采用__________法，原因是_________________________________________。
（3）某实验小组通过对相同条件下毛霉发酵制作豆豉和固定化酶发酵制作豆豉进行比较后发现，在发酵中后期，使用固定化酶发酵制作豆豉效率相对较低，发酵时间较长，其原因可能是__________。
（4）果酒的制作是发酵技术的又一重要应用，与制作果醋相比，其所需的发酵温度较低，造成这种差异的主要原因是___________________________________________________________________。
中央电视台《舌尖上的中国》栏目介绍了我国各地的美食，其中利用发酵技术制作的各类特色食品，如果醋、腐乳、泡菜等，很好地展现了广大人民群众的智慧。请回答下列问题：
（1）延安洛川的苹果不仅好吃，延安洛川产的苹果醋饮也非常好喝。工业上酿制苹果醋通常有两条途径，一条途径是向捣碎的苹果汁中直接接种 ________ (填微生物名称)，经过一次发酵制成；另一条途径需经过先后两次发酵获得，即________________。
（2）“王致和”腐乳是我国的著名品牌，通过发酵，豆腐中营养物质的种类____(填“增多”或“减少”)。制作腐乳时加盐腌制后需要加入卤汤，若卤汤中的酒精含量过高，则会导致腐乳____。
（3）泡菜具有独特的风味，提起酸菜，自然会让人联想“翠花，上酸菜”，那可是东北一大美食。在我国的泡菜品种中，东北酸菜和四川泡菜非常有名，其实，在陕西北部，人称“陕北”的酸菜，那也是绝对美味。在制作泡菜过程中，向泡菜坛中注入盐水前，煮沸所用盐水的目的是___________。在泡菜制作过程中，亚硝酸盐含量的变化情况是______________。
