Question

叶绿体是绿色植物光合作用的场所，高完整度的叶绿体的分离是进行光合作用及其调控机理研究的重要保证。 下面是某研究小组进行叶绿体分离的实验流程（如图1）。请回答下列问题：

（1）以上采取的分离叶绿体的方法称为________法。研磨时注意不要用力过猛和研磨过细，其目的是______。

（2）将组织匀浆在100r/min的条件下离心2min，以去除其中的组织残渣和一些______。叶绿体的分离应在0.35mV/L NaCl溶液（等渗溶液）中进行，以免因______的改变使叶绿体受到损伤。

（3）取一滴叶绿体悬液滴于载玻片中央，盖上盖玻片，用高倍显微镜观察。下列关于对菠菜叶离体叶绿体观察结果的描述，正确的有______。

A.呈椭球形            B.呈螺旋式带状            C.具有双层膜            D.内部含有较深的绿色小颗粒

（4）将分离得到的新鲜叶绿体置于白光下照射一段时间后，突然改用光照强度与白光相同的绿光照射，短时间内，叶绿体中C₃化合物的相对含量______（填“增多”或“减少”或“不变”）。

（5）小麦叶片富含纤维素，用上述方法无法成功分离叶绿体，小麦叶绿体的分离可以先利用______酶处理小麦幼苗叶，获得原生质体，再从原生质体中分离出高活性的叶绿体。

Answer

差速离心法 防止叶绿体被破坏 未被破碎的完整细胞 渗透压 AD 增多 纤维素酶和果胶酶

【解析】

差速离心法常用于获取细胞中的某一物质，其原理是在一定转速条件下，不同密度大小的物质沉降速度不一样，最终使有密度差异的物质得以分离。

据图分析，图示为叶绿体的分离过程，实验过程包括研磨、过滤、低速离心、高速离心、制备悬浮液、观察与检测，可见分离叶绿体采用的是差速离心法。

（1）根据以上分析已知，图示分离叶绿体的方法为差速离心法；研磨时注意不要用力过猛，也不必研磨过细，以防破坏叶绿体的结构。

（2）将组织匀浆在100r/min的条件下离心2min，以去除其中的组织残渣和一些未被破碎的完整细胞；叶绿体的分离应在0.35mV/L NaCl溶液（等渗溶液）中进行，以免渗透压的改变使叶绿体受到损伤。

（3）普通光镜下，可看到叶绿体为绿色椭球形；在高倍镜下可看到叶绿体内部含有较深的绿色小颗粒，即基粒；而叶绿体具有双层膜需要在电子显微镜下才能观察到，故选AD。

（4）根据题意分析，突然改用光照强度与白光相同的绿光照射，则光反应减弱，产生的ATP和[H]减少，导致三碳化合物的还原减弱，而三碳化合物的生成速率基本不变，因此短时间内三碳化合物的含量增加。

（5）小麦细胞壁的主要成分是纤维素和果胶，因此用纤维素酶和果胶酶处理可获得原生质体。