Question

下图是某基因工程中构建重组质粒的过程示意图，载体质粒PO具有四环素抗性基因  ( tel^r)和氨苄青霉索抗性基因(amp^r)。请回答下列问题：

(1)基因工程中所用的目的基因可以从自然界中已有的物种中分离出来，也可以 _________。利用PCR技术扩增目的基因片段时，常使用的酶是____ 。

(2)重组载体构建的过程中所需的酶有 ____和 ____。

(3)为进一步鉴定菌体是否含有重组质粒P3，采用含有不同抗生素的平板进行筛选，得到A、B、C三类菌落，其生长情况如下表（“+”代表生长，“-”代表不生长）。

菌落类型 平板类型	A	B	C
无抗生素	+	+	+
氨苄青霉素	+	-	+
四环素	+	-	-
氨苄青霉素+四环素	+	-	-

根据表中结果判断，A、B、C菌落质粒导入情况分别是____、____、____。

(4)将目的基因导入动物细胞的常用方法是____。

Answer

用人工的方法合成 热稳定DNA聚合酶（或“Taq酶”或“Taq DNA聚合酶”） 限制性核酸内切酶（或“限制酶”或“EcoR V”） DNA连接酶 已导入质粒PO 未导入质粒 已导入质粒P3 显微注射技术

【解析】

基因表达载体的基本结构包括复制原点、目的基因、标记基因、启动子、终止子等。分析题文描述和图示信息可知，载体质粒PO含有的氨苄青霉素抗性基因（ampr）和四环素抗性基因（tetr）都属于标记基因，可用于检测目的基因是否导入受体细胞；EcoRV酶为限制酶，其切割质粒后会破坏四环素抗性基因（tetr）。

(1) 基因工程中所用的目的基因可以从自然界中已有的物种中分离出来，也可以用人工的方法合成。利用PCR技术扩增目的基因片段时，所控制的温度条件至少为50℃左右，常使用的酶是具有耐高温特性的热稳定DNA聚合酶（或“Taq酶”、“Taq DNA聚合酶”）。

(2) 重组载体构建的过程中，需使用限制酶（EcoRV）切割载体质粒和含有目的基因的DNA片段，再用DNA连接酶将切割后的载体质粒和目的基因连接起来。

(3) 由图可知：用限制酶（EcoRV）切割后破坏了四环素抗性基因（tetr），但是没有破坏氨苄青霉素抗性基因（ampr），因此含有重组质粒P3的菌落在含有四环素的培养基中不能生长，但在含有氨苄青霉素的培养基中能生长。分析表中信息：A菌落在含有氨苄青霉素和四环素的培养基中都能够生长，说明其菌体中含有的氨苄青霉素抗性基因（ampr）和四环素抗性基因（tetr）的结构均完好，因此已导入质粒PO。B菌落在含有任何抗生素的培养基中都不能生长，说明其菌体中不含有ampr tetr，所以未导入质粒。C菌落在含有四环素的培养基中不能生长，但在含有氨苄青霉素的培养基中能生长，说明其菌体中含有的ampr的结构完好，而含有的tetr的结构被破坏，因此C菌落已导入质粒P3。

(4) 将目的基因导入动物细胞，常用显微注射技术。