Question

如图是从土壤中筛选分解尿素细菌的过程，请回答下列问题

（1）图中选择培养基应以_____为唯一氮源；鉴别培养基还需添加______作指示剂，分解尿素细菌在该培养基上生长一段时间后，其菌落周围的指示剂将变成______色。土壤中的细菌之所以能将尿素分解，是因为这些细菌能合成_______。

（2）制备实验所需的培养基时，在各成分都溶化后和分装前，要进行的是__________和灭菌，对培养基进行灭菌的常用方法是_____________。倒平板时要待平板冷凝后，将平板倒置，其主要目的是___________。

（3）在5个细菌培养基平板上，均接种稀释倍数为10⁵的土壤样品溶液0.1ml，培养一段时间后，平板上长出的细菌菌落数分别为191、16、326、173和182。该过程采取的接种方法是_____________，每克土壤样品中的细菌数量为_______个/ml；此计数方法测得的数目往往比活菌的实际数目_____，理由是：______________。在统计数目时，除了用上述方法进行菌落计数外，___________________也是测定微生物数量的常用方法。

Answer

尿素 酚红 红 脲酶 调整pH 高压蒸汽灭菌 防止培养皿盖上的冷凝水落入培养基造成污染 稀释涂布平板法 1.82×108 少 两个或更多个细胞连在一起，平板上观察到的只是一个菌落 显微镜直接计数

【解析】

1、培养基选择分解尿素的微生物的原理：培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源．缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。

2、鉴定分解尿素的细菌：细菌合成的脲酶将尿素分解成氨，氨会使培养基的碱性增强。在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂培养细菌，若指示剂变红，可确定该种细菌能够产生脲酶，并分解尿素。

3、微生物常见的接种的方法

①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。

②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。

4、统计菌落数目的方法

（1）显微镜直接计数法

①原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量；②方法：用计数板计数； ③缺点：不能区分死菌与活菌。

（2）间接计数法（活菌计数法）

①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌．通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。

②操作

a、设置重复组，增强实验的说服力与准确性。

b、为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数。

③计算公式：每克样品中的菌株数=（c÷V）×M，其中c代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（mL），M代表稀释倍数．。

（1）图中选择培养基应以尿素为唯一氮源；鉴别培养基还需添加酚红作指示剂，分解尿素细菌在该培养基上生长一段时间后，其菌落周围的指示剂将变成红色。土壤中的细菌能合成的脲酶，将尿素分解成氨之后，才能被植物利用。

（2）制备实验所需的培养基时，在各成分都溶化后和分装前，要进行的是调整pH和灭菌，培养基用高压蒸汽进行灭菌．倒平板时防止培养皿盖上的冷凝水落入培养基造成污染，因此要待平板冷凝后，将平板倒置。

（3）用于计数细菌菌落数的常用方法是稀释涂布平板法，统计的菌落数应介于30～300之间，故选择细菌菌落数为191、173和182的平板计数。所以每克土壤样品中的细菌数量=（191+173+182）÷3÷0.1×105=1.82×108个。由于两个或多个细菌连接在一起时，往往统计的是一个菌落，所以用此计数方法测得的细菌数较少。测定微生物数量常用的方法有稀释涂布平板计数和血细胞计数板显微镜直接计数。