Question

现代生物科技中筛选是一个重要过程。请回答下列技术有关筛选问题：

（1）过程③是杂交瘤细胞的培养，在体外培养时培养基中需要提供一定浓度的CO₂，目的是_______。杂交瘤细胞需要经过两次筛选，第一次筛选的目的是_________。

（2）过程②诱导融合运用的原理是_______，该过程中区别于植物原声质体融合的方法是用________

处理。植物原生质体融合后，需从_______种两两融合的细胞中筛选出杂种细胞的原声质体。

（3）研究人员采用PCR技术获取酶D基因和转运肽基因，该技术是利用________ 的原理，使相应基因呈指数增加。所含三种限制酶（XbaⅠ、ClaⅠ、SacⅠ）的切点如图所示，则用______和________处理两个基因后，可得到酶D基因和转运肽基因的重组基因，选用这两种酶的原因是_________。

Answer

维持培养液的pH 获得杂交瘤细胞 细胞膜的流动性 灭活的病毒 3 DNA双链复制 ClaⅠ DNA连接酶 需要重组的两个基因都具有ClaⅠ切割位点，两个基因重组需要DNA连接酶链接

【解析】

1.单克隆抗体的制备是将骨髓瘤细胞与浆细胞结合，经过选择培养基的筛选得到杂交瘤细胞并经专一抗体检测后，培养能产生特定抗体的杂交瘤细胞即可得单克隆抗体，涉及动物细胞培养和动物细胞融合技术；杂交瘤细胞集合了两个细胞的遗传物质，但不一定全部表达；单克隆抗体最广泛的用途是用作体外诊断试剂，具有准确、快速等优点。

2.基因文库包括cDNA文库、基因组文库等．某个群体包含一种生物所有的基因的文库叫基因组文库，而用某种生物发育的某个时期的mRNA反转录产生的多种互补DNA片段属于cDNA文库。

3.限制酶能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性．同种限制酶切割能够产生相同的黏性末端，便于质粒和目的基因连接。

（1）动物细胞培养时需要加入一定量的二氧化碳，其作用是维持培养液的pH值。杂交瘤细胞需要经过两次筛选，第一次筛选的目的是利用选择培养基将融合后的杂交瘤细胞选择出来。

（2）图中过程②诱导动物融合运用的原理是细胞膜的流动性，诱导动物细胞融合采用的方法包括：物理法、化学法和生物法，其不同于植物原生质体融合的方法是利用灭活的病毒介导动物细胞融合。植物原生质体融合后，如果考虑两两融合有三种情况，即同种细胞原生质体融合和杂种细胞原生质体间的融合，经过选择培养从中选择出杂种原生质体。

（3）PCR技术采用体外DNA双链复制的原理，使相应基因呈指数增加。分析转运肽基因和酶D基因的限制酶切点可知，两个片段同时具有ClaⅠ限制酶切割位点，这样可以用ClaⅠ限制酶和DNA连接酶处理两个基因后，得到相连的重组基因。