Question

乙型脑炎病毒（JEV）是一种 RNA 病毒，病毒的 E 蛋白参与病毒复制过程。研究人员利用基因重组的方法构建了二种新型 JEV 疫苗：DNA 疫苗和 E 蛋白疫苗。图示主要流程。

1.过程①为_____；过程②所需要的酶是_____。

2.研究发现：受体细胞为大肠杆菌或酵母菌时，所形成的 E 蛋白结构不完全相同。原因是     。

A.大肠杆菌无细胞核，酵母菌有细胞核可进行基因转录

B.大肠杆菌无膜结构的细胞器，无法对蛋白质进一步加工

C.两种受体细胞在基因表达时所使用的密码子不同

D.两种受体细胞在基因表达时所遵循的碱基互补配对原则不同

3.关于 DNA 疫苗的叙述，正确的是   

A.分子较小，结构较稳定 B.能通过 PCR 技术增加生产量

C.能激活机体产生特异性免疫 D.DNA 疫苗已广泛用于人工免疫

如图表示N 质粒和成功导入 E 蛋白基因的质粒 EN。为筛选含 EN 的菌落，可用含不同抗生素： 氨苄青霉素和四环素的平板培养基进行筛选，现得到 A、B、C 三类菌落，生长情况如表 。（‘+’代表生长，‘-’代表不生长）

平 板 菌 落	A	B	C
无抗生素	+	+	+
氨苄青霉素	+	+	-
四环素	+	-	-
氨苄青霉素+四环素	+	-	-

4.表 中无抗生素平板培养基的作用是_____。另三种培养基属于下列选项中的_____。

A．固体培养基     通用培养基          B．固体培养基     选择培养基

C．液体培养基 通用培养基          D．液体培养基 选择培养基

5.据图 和表判断，     。

A.A 菌落细胞被导入了N 质粒 B.B 菌落细胞被导入 EN 质粒

C.C 菌落细胞未被导入任何质粒 D.两种抗生素均能抑制 E 蛋白表达

Answer

1. 逆转录 DNA连接酶、限制酶（限制性核酸内切酶）

2.B

3.ABC

4. 对照 B

5.ABC

【解析】

基因表达载体的基本结构包括复制原点、目的基因、标记基因、启动子、终止子等。根据题干信息和图形分析，P0是载体质粒，其含有的氨苄青霉素抗性基因（ampr）和四环素抗性基因（tetr）都属于标记基因，可以用检测目的基因是否导入受体细胞；EcoRV酶为限制酶，其切割质粒后悔破坏了四环素抗性基因（tetr）。

1.乙型脑炎病毒RNA经逆转录可得①cDNA；将E蛋白基因和P质粒连接需用②限制酶和DNA连接酶。

2.大肠杆菌属于原核生物，酵母菌属于真核生物，由于大肠杆菌没有膜结构的细胞器，无法对蛋白质进一步加工，故当受体细胞为大肠杆菌或酵母菌时，所形成的E蛋白结构不完全相同。

3.DNA疫苗属于基因，分子较小，结构较稳定，能通过PCR技术增加生产量，还能通过转录和翻译表达出相应的产物，引起免疫反应。

4.P0是载体质粒，其含有的氨苄青霉素抗性基因（ampr）和四环素抗性基因（tetr）都属于标记基因，可以用检测目的基因是否导入受体细胞，表中无抗生素平板培养基的作用是对照作用，另三种培养基属于属于选择培养基。

5.根据表格分析，A类菌落在氨苄青霉素和四环素的培养基中都能够生长，说明其导入的是N；B类菌落在氨苄青霉素的培养基中能生长，C类菌落在任何抗生素的培养基中都不能生长，说明其没有导入任何质粒，两种质粒中含有氨苄青霉素抗性基因（ampr）和四环素抗性基因（tetr），能表达产生相应的抗生素，但E蛋白基因的表达与两种抗生素无关。