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下表是几种限制酶识别序列及其切割位点,图中甲、乙中标注了相关限制酶的酶切位点,其...

下表是几种限制酶识别序列及其切割位点,图中甲、乙中标注了相关限制酶的酶切位点,其中切割位点相同的不再重复标注。请回答下列问题。

限制酶

BamH

Bcl

Sau3A

Hind

识别序

列及切割

位点

GGATCC

CCTAGG

TGATCA

ACTAGT

GATC

CTAG

AAGCTT

TTCGAA

 

 

 

 

 

 

 

(1)用图中质粒和目的基因构建重组质粒,应选用限制酶为______,酶切后的载体和目的基因片段通过________酶作用后,获得重组质粒。

(2)BclⅠ酶切的DNA末端与HindⅢ酶切的DNA末端可直接被DNA连接酶连接,原因是_______,这两种酶_____________(都能” “都不能只有一种能”)切开连接的部位,原因是________________________

(3)若用Sau3AⅠ切割图甲质粒最多可能获得______种大小不同的DNA片段。
(4)为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌,应在筛选平板培养基中添加________平板上长出的菌落,常用PCR鉴定,所用的引物组成为图乙中的____________________________________

 

BclⅠ和HindⅢ DNA连接 黏性末端相同 都不能 核苷酸序列不能再被BclⅠ和HindⅢ识别切割 7 四环素 引物A和引物C 【解析】 1、选择限制酶需注意插入目的基因时不能破坏标记基因。PCR扩增基因时,两种引物结合的部位相反,延伸的方向相反。限制酶具有特异性,不同的限制酶识别不同的序列,判断某种限制酶能否切割该片段,应该看该片段中是否含有限制酶的识别序列。 2、根据题意和图示分析可知:在质粒上存在BamH I、BclⅠ、 BamH I和HindⅢ等四个酶切位点,其中BamHI的切割位点在两个抗性基因上都有,Ⅰ而抗性基因为载体的标记基因,因此不可用该酶切割。在目的基因上,BclⅠ、BamH I、HindⅢ和 Sau3A I四种酶也存在酶切位点。 (1)若选BamHⅠ和HindⅢ切割,则会破坏质粒中的两个抗性基因,不利于后期的筛选。选择的限制酶应在目的基因两侧切割,切割后的DNA片段用DNA连接酶连接。 (2)BamHⅠ酶切的DNA末端与BclⅠ酶切的DNA末端可直接被DNA连接酶连接,原因是黏性末端相同,但是被DNA连接酶连接后便不能再被这两种限制酶切割了,因为不满足两种限制酶对其所识别序列的特异性要求。 (3)Sau3AⅠ在图甲质粒中一共有3个切点,考虑完全酶切和不完全酶切,最多可能得到7种不同大小的DNA片段。 (4)为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌,应在筛选平板培养基中添加四环素(根据标记基因的种类),平板上长出的菌落,常用PCR鉴定,所用的引物应具有成对反向的特点。
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考点分析:
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红细胞含有大量血红蛋白,红细胞的机能主要是由血红蛋白完成,血红蛋白的主要功能是携带O2CO2,我们可以选用猪、牛、羊或其他脊椎动物的血液进行实验,来提取和分离血红蛋白。请回答下列有关问题:

1)血红蛋白的提取和分离一般可分为四步:________、粗分离、______________

2)实验前取新鲜的血液,要切记在采血容器中预先加入柠檬酸钠,取血回来,马上进行离心,收集血红蛋白溶液。

加入柠檬酸钠的目的是_____________

以上所述的过程即是样品处理,它包括红细胞的洗涤、______________、分离血红蛋白溶液。

3)收集的血红蛋白溶液要进行粗分离,其方法是___________

4)然后通过_____________法将样品纯化,样品纯化的目的是____________。最后经___________进行纯度鉴定。

5)电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子的______、形状的不同,使带电分子产生不同的迁移速率,从而实现样品中各种分子的分离。

 

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废纸主要成分是木质纤维。图甲是工业上利用废纸生产乙醇的基本工作流程。回答下列问题。

 

 

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(4)生产中可以满足④环节的常见菌种是_________。玉米秸秆中的纤维素经充分水解后的产物可为该微生物的生长提供______

 

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