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如图是制备抗埃博拉病毒(EBOV)VP40蛋白单克隆抗体的过程,请据图回答问题:...

如图是制备抗埃博拉病毒(EBOV)VP40蛋白单克隆抗体的过程,请据图回答问题:

 

(1)通过PCR技术获取目的基因的过程中,反应体系中除了加入含有EBOV VP40基因的DNAdNTP,还应该有___________酶和根据目的基因的核苷酸序列设计的_____________

(2)选用EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切的优点是____________________________

(3)大肠杆菌获得重组质粒A,从而发生稳定遗传变化的过程可称为________。该过程首先需要用________处理大肠杆菌,使其更易吸收环境中的DNA分子。

(4)过程⑥常用的不同于诱导植物原生质体融合的方法是用___________处理,该过程能产生的两两融合的细胞有_______种。若把在HAT选择培养基上存活的细胞全部培养在同一培养基中,从中提取出的抗体_________(不是”)单克隆抗体。

(5)体内培养是指把能产生特异性抗体的杂交瘤细胞注射到小鼠腹腔内进行培养,一段时间后,从__________中提取单克隆抗体。图示过程应用了哪些生物技术:__________________________

 

Taq(热稳定的DNA聚合) 引物 防止酶切产物之间的随意连接,提高连接成功率(其他合理答案也可) 转化 Ca2+ 灭活的病毒 3 不是 腹水 基因工程、动物细胞培养、动物细胞融合 【解析】 1、图示过程中,①为获取目的基因,②为形成重组质粒,③为目的基因的导入,④为获取相应的蛋白质,⑤为注射入B淋巴细胞,⑥为形成杂交瘤细胞,⑦为获取单克隆抗体。 2、PCR技术的过程:高温变性、低温复性、中温延伸,条件:模板DNA、四种脱氧核苷酸、一对引物、热稳定DNA聚合酶(Taq酶)。 3、获得目的基因的方法:①从基因文库中获取②利用PCR技术扩增③人工合成 (化学合成)。原核基因采取直接分离获得,真核基因是人工合成。 4、DNA重组技术至少需要三种工具:限制性核酸内切酶(限制酶) 、DNA连接酶、运载体. 5、动物细胞融合原理是:细胞增殖、细胞膜的流动性;细胞融合的方法有:物理法:离心、振动、电激;化学法:聚乙二醇;生物法:灭活的病毒(灭活的仙台病毒) 。最广泛的应用是:制备单克隆抗体,一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体,从血清中分离出的抗体产量低、纯度低、特异性差。 (1)PCR扩增目的基因需要热稳定的DNA聚合酶和引物。 (2)EcoRⅠ和XhoⅠ切割形成的黏性末端不同,而DNA连接酶只能将具有相同黏性末端的DNA片段连接起来,因此为了防止目的基因反向连接或自身环化,酶切时可同时选用EcoRⅠ和XhoⅠ,提高连接成功率。 (3)大肠杆菌获得重组质粒,从而发生稳定遗传变化的过程可称为转化,将目的基因导入细菌的过程中首先需要用Ca2+处理大肠杆菌,使其更易吸收环境中的DNA分子。 (4)不同于诱导植物原生质体融合的诱导动物细胞融合的方法是用灭活的病毒处理。两种细胞(分别用A细胞、B细胞表示)两两融合得到A—A、A—B、B—B三种融合细胞,选择培养基上的杂交瘤细胞可产生多种抗体,因此产生的抗体不是单克隆抗体。 (5)将能产生特异性抗体的杂交瘤细胞注射到小鼠腹腔内进行培养,一段时间后,可从腹水中提取单克隆抗体。题图示过程应用了基因工程、动物细胞培养、动物细胞融合等生物技术。
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考点分析:
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如图为动物细胞培养过程中细胞增殖曲线()及细胞变化图(),请回答下列问题:

     

(1)图甲中____点以后表示细胞的传代培养,AB段可能发生了如图乙___(填序号)所示的_______________现象,在进行BC过程培养前,需要用________处理细胞。

(2)动物细胞培养,一般传至_________代以内细胞能保持正常的二倍体核型。

(3)为制备单克隆抗体,需将_______注射到小鼠体内,以此获取_______,同时将该细胞与图乙____(填序号)所示的细胞融合形成杂交瘤细胞,该杂交瘤细胞的特点是______________________。为筛选能够产生单克隆抗体的杂交瘤细胞,可用_________培养基来达到目的。

 

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根据下面植物体细胞杂交技术流程图,回答相关问题:

(1)运用传统有性杂交(即用番茄、马铃薯杂交)自然状态下不能得到杂种植株,原因是_________________________________________

(2)在利用杂种细胞培育杂种植株的过程中,依据的原理是________,其中过程②称为________,植物体细胞融合完成的标志是________

(3)已知番茄、马铃薯分别为四倍体、二倍体,则“番茄—马铃薯”属于________倍体植株。

(4)已知柴油树种子含有的柴油是植物细胞的代谢产物,可用植物组织培养来实现柴油的工业化生产。若利用此技术,将柴油树细胞培养到________阶段即可(填字母编号)。

(5)若培育抗虫棉,将抗虫基因通过适当的途径导入棉花受精卵,然后进行组织培养,该过程相当于________(填字母编号)。

(6)人工种子是由发育到________过程(填字母编号)的结构包裹上人工种皮制备的。

 

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下表是几种限制酶识别序列及其切割位点,图中甲、乙中标注了相关限制酶的酶切位点,其中切割位点相同的不再重复标注。请回答下列问题。

限制酶

BamH

Bcl

Sau3A

Hind

识别序

列及切割

位点

GGATCC

CCTAGG

TGATCA

ACTAGT

GATC

CTAG

AAGCTT

TTCGAA

 

 

 

 

 

 

 

(1)用图中质粒和目的基因构建重组质粒,应选用限制酶为______,酶切后的载体和目的基因片段通过________酶作用后,获得重组质粒。

(2)BclⅠ酶切的DNA末端与HindⅢ酶切的DNA末端可直接被DNA连接酶连接,原因是_______,这两种酶_____________(都能” “都不能只有一种能”)切开连接的部位,原因是________________________

(3)若用Sau3AⅠ切割图甲质粒最多可能获得______种大小不同的DNA片段。
(4)为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌,应在筛选平板培养基中添加________平板上长出的菌落,常用PCR鉴定,所用的引物组成为图乙中的____________________________________

 

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红细胞含有大量血红蛋白,红细胞的机能主要是由血红蛋白完成,血红蛋白的主要功能是携带O2CO2,我们可以选用猪、牛、羊或其他脊椎动物的血液进行实验,来提取和分离血红蛋白。请回答下列有关问题:

1)血红蛋白的提取和分离一般可分为四步:________、粗分离、______________

2)实验前取新鲜的血液,要切记在采血容器中预先加入柠檬酸钠,取血回来,马上进行离心,收集血红蛋白溶液。

加入柠檬酸钠的目的是_____________

以上所述的过程即是样品处理,它包括红细胞的洗涤、______________、分离血红蛋白溶液。

3)收集的血红蛋白溶液要进行粗分离,其方法是___________

4)然后通过_____________法将样品纯化,样品纯化的目的是____________。最后经___________进行纯度鉴定。

5)电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子的______、形状的不同,使带电分子产生不同的迁移速率,从而实现样品中各种分子的分离。

 

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废纸主要成分是木质纤维。图甲是工业上利用废纸生产乙醇的基本工作流程。回答下列问题。

 

 

(1)自然界中①环节需要的微生物大多分布在_________的环境中。②中获得的酶是__________酶。 

(2)若从土壤中分离出上述微生物,应以_________为唯一碳源的培养基进行培养,并加入_____________形成红色复合物进行筛选,培养基上会出现以该菌的菌落为中心的_______ 

(3)接种后一个平板经培养后的菌落分布如图乙所示,推测接种时可能的操作失误是___ 向试管内分装含琼脂的培养基时,若试管口黏附有培养基,需要用酒精棉球擦净的原因是_ 

(4)生产中可以满足④环节的常见菌种是_________。玉米秸秆中的纤维素经充分水解后的产物可为该微生物的生长提供______

 

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