癌细胞表面蛋白“PDL﹣1”与T细胞表面蛋白“PD﹣1”特异性结合后，可抑制T细胞活性并启动其凋亡，导致肿瘤细胞发生免疫“逃逸”。研究者对“PD﹣1”基因进行克隆、表达及生物学活性鉴定，为制备抗体打基础。研究中所用引物α和β碱基序列见图1、几种常用限制酶名称及识别序列与酶切位点见图2：
（1）首先提取细胞中的mRNA反转录生成_____作为模板：设计含有不同的限制酶切点的α和β序列为引物，通过_____技术扩增目的基因。
（2）选用图1中的两种名称分别为_____的限制酶将“pIRES2﹣EGFP质粒”载体进行双切，再用DNA连接酶将其与目的基因拼接，构建表达载体。该表达载体的组成，除了目的基因、标记基因抗卡那霉素基因外，还必须具有_____等
（3）而后一定温度下，与经过Ca2+处理的感受态大肠杆菌混合培养在含有_____培养基中，可筛选出已经完成转化的大肠杆菌，继续培养该种大肠杆菌以扩增重组DNA。
（4）将扩增后的“pIRES2﹣EGFP载体/PD﹣1重组DNA”转入可高度表达外源基因的原代293T细胞。一段时间后，为确定PD﹣1基因是否表达，检测细胞膜表面是否具有_____。为判断其是否具有生物学活性和功能，则可裂解293T细胞，提取该物质看能否与_____发生结合，从而阻断“PD﹣1与PDL﹣1信号通路”。研究中还会有一步骤，只将“pIRES2﹣EGFP载体”转入293T细胞，其目的是_____。
[生物—一选修l：生物技术实践] 为了调查厦门自来水的质量情况，某研究小组对自来水水样中的细菌含量进行了测定，请回答下列问题：
(I)在微生物的培养过程中，对培养基灭菌常用的方法是__。为防止冷凝水影Ⅱ向细菌的生长，需将培养皿____培养。
(2)若小组采用平板划线法分离水样中的细菌，在培养基上共画了5个区域，则至少需要__次灼烧接种环。
(3)可通过滤膜法检测自来水中大肠杆菌的数量，将已知体积的水过滤后，将滤膜放在____培养基上培养。该培养基除了为大肠杆菌的生长繁殖提供水和碳源外，还应提供____等基本营养成分。
(4)某同学采用稀释涂布平板法统计菌落数目，菌落分布如图所示，推测该同学可能的操作失误是___。
蚕蛾染色体（2n＝56），ZW型性别决定。一种罕见的黑体雄蛾与常见的浅色体雌蛾杂交，F1为黑体。F1互交，F2所有雄蛾都是黑体，而雌蛾中一半为浅色体。用A、a表示不同体色基因。回答以下问题：
（1）若大量亲本黑体雄蛾与浅色体雌蛾杂交，观察到后代有极少的浅色体雄蛾，有不同的假说。假说一：后代少了一条染色体：假说二：发生了基因突变：假说三：_____。
（2）①为验证假说一是否成立，可以取后代浅色体雄蛾具有分裂能力的体细胞，观察处于_____期染色体数目，异常：或者观察后代的浅色体雄蛾_____时期的细胞，四分体的个数为_____个，假说成立。原因可能是亲本黑体雄蛾少数精原细胞在减数分裂发生_____情况，产生某种异常精子与卵细胞结合后，发育为性染色体组成为ZO的后代浅色体雄蛾。
②若假说一不成立，可用荧光标记法将A、a基因分别标记为蓝色、绿色。若后代的浅色体雄蛾初级精母细胞中荧光点数目和颜色为_____，则假说二成立，否则假说三成立。
（3）蚕卵的颜色由10号常染色体上的基因B和b决定，常见颜色为紫灰色和白色。现将两只蚕蛾多次杂交，后代出现的性状分离比为：紫灰色雄性：紫灰色雌性：白色雄性：白色雌性＝6：3：2：1．请做出合理的解释_____。
下图为人体体温调节的示意图，请据图回答问题：
（1）受到寒冷刺激时，激素c、d的分泌均会增加，其中产生c的过程属于________调节（填“神经”、“体液”、“神经一体液”），产生d的过程中效应器是________。
（2）激素c和d都能作用于骨骼肌和内脏，通过_________产生热能使体温维持恒定。
（3）寒冷使人面色变白，原因是_________________。
（4）激素e与肾小管、集合管上皮细胞表面受体结合后，经过信息转换，促使细胞内囊泡向细胞膜定向转移，从而提高肾小管和集合管对水的通透性，囊泡膜上很可能含有_________，据此推测，尿液中的水可能以_________的方式被重吸收。
WWP2基因在肿瘤细胞中高度表达，WWP2蛋白参与肿瘤细胞的生长、存活和转移等。为获得较多WWP2蛋白，利用基因工程技术设计引物，其中正向引物5′含有 EcoRI酶切位点，反向引物5′含有XhoI酶切位点。将WWP2基因与相应载体构建重组质粒导入人胚肾细胞。回答下列问题：
(1)利用上述的引物，以肺癌细胞的cDNA为模板，通过___________扩增___________的编码序列，获得需要的目的基因片段。
(2)把获得的目的基因片段和相应载体，都用___________进行酶切，分别在5′端与3′端形成___________，避免自身环化。然后利用___________将目的基因片段和相应载体连接，得到重组质粒。
(3)先将重组质粒导入经___________处理过的大肠杆菌细胞，培养后从中分离得到较多的重组质粒。
(4)培养人胚肾细胞时，先用___________使人胚肾细胞分散成单个细胞，用含有___________的合成培养液培养，并将培养瓶置于体积分数为5%的___________与空气混合气体的培养箱中培养。
(5)将重组质粒导入人胚肾细胞中，48小时后提取蛋白质并检测到WWP2蛋白，说明___________。
(6)致癌因子会损伤肺泡细胞中的___________，使原癌基因和抑癌基因发生突变。研究WWP2蛋白的表达，为肺癌治疗新靶点奠定了基础。
某中学生物兴趣小组趁假期对当地一立体观光农业产业园进行了调查。
（1）A组同学在院内池塘中发现了一种鱼，其成年鱼生酒在底层，取食多种底栖动物，而该种鱼的幼体生活在水体上层，滤食浮游动物和浮游藻类。请据此回答：
①该种鱼的幼体与浮游动物的种间关系有________________。
②某段时间内鱼塘内浮游藻类疯长，导致鱼虾大量死亡，鱼塘内水变黑变臭，这种现象属于_________调节，体现了鱼塘生态系统________有限。之后工人将鱼塘水排干，在再次放水之前，鱼塘内迅速长满杂草，这种变化属于群落的_______演替。
（2）B组同学发现葡萄园照光时间长的地方葡萄挂果比照光时间短的地方要好，这种现象说明信息传递的作用是_______。
（3）C组同学准备釆集部分土壤调查土壤中小动物的类群丰言度，他们需要统计样本中小动物的____来推测园内土壤动物的丰富度。
