Question

为了分离和纯化高效分解石油的细菌，科研人员利用被石油污染过的土壤进行如图A所示的实验。

（1）配制好的培养基灭菌通常可以使用___________法。步骤③与步骤②中培养基成分的最大区别是______________________________。

（2）同学甲进行过程④的操作，其中一个平板经培养后的菌落分布如图B所示。该同学的接种方法是_________________；推测同学甲用此方法接种时出现图B结果可能的操作失误是___________________；在接种前，为检测培养基平板灭菌是否合格，应进行的操作是_________________________。

（3）同学乙也按照同学甲的接种方法进行了过程④的操作：将1mL样品稀释100倍，在3个平板上分别接入0．1mL稀释液。乙同学每隔24h统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时的记录作为结果，理由是_______________。经统计，3个平板上的菌落数分别为56、58和57。据此可得出每升样品中的活菌数为___________________。

（4）步骤⑤后取样测定石油含量的目的是_______________________。

Answer

高压蒸汽灭菌 石油是唯一碳源 稀释涂布平板法 涂布不均匀 随机选取若干灭菌后的空平板先行培养一段时间 防止因培养时间不足而遗落菌落数目 筛选出分解石油能力最好的细菌

【解析】

1、微生物常见的接种的方法：

①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养.在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。

②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落.

2、分析图B：图B采用的是稀释涂布平板法，但涂布不均匀。

（1）培养基通常使用高压蒸汽灭菌法灭菌。该实验的目的是为了分离和纯化高效分解石油的细菌，因此步骤③与步骤②中培养基成分相比，最大的区别是石油是唯一碳源。

（2）图B采用的接种方法是稀释涂布平板法，出现图B结果可能的操作失误是涂布不均匀。在接种前，可随机选取若干灭菌后的空平板先行培养一段时间，用来检测培养基平板灭菌是否合格。

（3）为防止因培养时间不足而遗落菌落数目，应选取菌落数目稳定时的记录作为结果。将1mL样品稀释100倍，在3个平板上分别接人0.1mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为56、58和57。据此可得出每升样品中的活菌数为（56+58+57）÷3÷0.1×1000×100=5.7×107个。

（4）步骤⑤后取样测定石油含量的目的是筛选出分解石油能力最强的细菌。