Question

白僵菌和绿僵菌是两种寄生在昆虫体内的真菌，现广泛应用于农林害虫的防治。科研人员利用基因工程术将绿僵菌的毒力蛋白相关基因M导入白僵菌细胞内，发现白僵菌杀虫能力大幅提高。请回答下列问题：
（1）利用PCR技术扩增M基因前，首先需获得绿僵菌的___________再根据___________序列设计2种特异性引物。科研人员还在2种引物上加入了不同的限制酶切位点，主要目的是便于目的基因与运载体连接及___________。在PCR反应体系中除了加入模板DNA，还需要添加__________（答出2点）。

（2）若要使M基因在受体细胞中稳定表达，需要___________，而不能将目的基因直接导入受体细胞。

（3）为检验M基因是否在白僵菌细胞内稳定存在，可提取连续培养3代的白僵菌基因组DNA，与__________进行分子杂交。若要检测M基因是否成功表达，需要提取白僵菌中的__________进行抗原抗体杂交。

Answer

基因组DNA M基因碱基 防止目的基因自我连接 dNTP 、Taq酶 构建基因表达载体 M基因探针 蛋白质

【解析】

基因工程技术的基本步骤：

1、目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成；

2、基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等；

3、将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法；

4、目的基因的检测与鉴定：（1）分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．（2）个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

（1）利用PCR扩增目的基因，首先需获得绿僵菌的基因组DNA，再根据M基因上游及下游的碱基序列，设计2种特异性引物。为了便于目的基因与运载体连接及防止目的基因自我连接常在2种引物上加入不同的限制酶切位点。PCR反应体系中除了加入模板DNA外，还需加入dNTP 、Taq酶、扩增缓冲液等。

（2）将目的基因导入受体细胞，需要构建基因表达载体，这样目的基因导入受体细胞才能进行稳定表达。

（3）检测转基因生物的DNA上是否插入目的基因，常用DNA分子杂交技术，则用M基因探针与目的基因进行杂交。检测目的基因是否表达出相应的蛋白质，常用抗原-抗体杂交技术，则需提取白僵菌中的蛋白质进行抗原抗体杂交。