Question

GRFT是一种来源于红藻的外源凝集素，能作为治疗艾滋病的候选药物。某实验小组将GRFT基因导入烟草细胞的染色体基因组中，发现烟草中GRFT基因的表达量可达60%~90%。请回答下列问题：

（1）将GRFT基因导入烟草细胞的染色体基因组的方法为__________，该方法能将GRFT基因导人烟草细胞的染色体基因组，利用的是T—DNA具有_________的特点。

（2）构建重组质粒时可插入NPTII基因，具有该基因的转基因植物的叶绿体离体培养时会出现退绿现象，据此可知重组质粒中的NPTII基因实质上是一种_________，其作用是_________。基因工程中的运载体除了质粒外，还有___________。

（3）欲大量获得GRFT，可利用植物组织培养技术将转基因烟草细胞培育到______阶段，原因是该阶段的细胞具有______________________的特点。

Answer

农杆菌转化法 可转移至受体细胞并且整合到受体细胞染色体的DNA上 标记基因 鉴别受体细胞中是否有目的基因，从而将含自的基因的细胞筛选出来 动植物病毒以及λ噬菌体的衍生物 愈伤组织 分裂、代谢旺盛

【解析】

基因工程技术的基本步骤：

（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。

（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。

（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。

（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

（1）将GRFT基因导入烟草细胞的染色体基因组的方法为农杆菌转化法，该方法能将GRFT基因导入烟草细胞的染色体基因组，农杆菌中Ti质粒上的T-DNA具有可转移至受体细胞并且整合到受体细胞染色体的DNA上的特点。

（2）构建重组质粒时可插入NPTII基因，具有该基因的转基因植物的叶绿体离体培养时会出现退绿现象，据此可知重组质粒中的NPTII基因实质上是一种标记基因，其作用是鉴别受体细胞中是否有目的基因，从而将含自的基因的细胞筛选出来。基因工程中的运载体除了质粒外，还有动植物病毒以及λ噬菌体的衍生物。

（3）欲大量获得GRFT，可利用植物组织培养技术将转基因烟草细胞培育到愈伤组织阶段;原因是该阶段的细胞分裂、代谢旺盛，可从培养液中大量获得GRFT。