Question

大肠杆菌是人和许多动物肠道中最主要且数量最多的一类细菌，含有2000种以上的蛋白质。回答下列问题：

（1）大肠杆菌的培养基为牛肉膏蛋白胨培养基，此培养基为大肠杆菌的生长提供____________。培养大肠杆菌时，在接种前通常需要检测固体培养基是否被污染，检测的方法是___________。

（2）利用平板划线法纯化大肠杆菌时，通过接种环在培养基表面连续划线，将聚集的菌种________分散到培养基的表面；长期保存纯化后的菌种，可以采用_______的方法。稀释涂布平板法是根据培养基上的菌落的数目来推测样品中的活菌数，其原理是_________________________________。

（3）利用凝胶色谱法分离大肠杆菌蛋白质过程如图一，正确的加样顺序是______________。图二、图三分别是同学甲、乙利用同一种样品分离得到的结果，则图三中与图二中蛋白质P对应的是_____。

Answer

碳源、氮源、维生素、水和无机盐 将未接种的培养基在适宜的条件下培养一段时间，观察培养基上是否有菌落出现 逐步稀释 甘油管藏 培养基表面的一个菌落来源于样品中的一个活菌 ②③④① 丙

【解析】

凝胶色谱法的原理是：小分子蛋白质容易进入凝胶内部的通道,路程较长、移动速度较慢，后被洗脱出来:而分子质量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，路程较长、移动速度较快，先被洗脱出来。

（1）微生物生长都需要碳源、氮源、水和无机盐等基本条件，蛋白陈是将肉、酪素或明胶用酸或蛋白酶水解后干燥而成，富含有机氮化合物，也含有一些维生素和糖类，因此添加在培养基中主要作为氮源，也可提供碳源和维生素，故牛肉膏蛋白胨培养基可为大肠杆菌提供碳源、氮源、维生素、水和无机盐；检测培养基是否被污染，需在接种前将空白培养基即未接种的培养基放在适宜的条件下放置一段时间，观察培养基上是否有菌落出现，若有菌落出现，则说明培养基被污染或灭菌不彻底，不能用于接种实验；

（2）平板划线法是一种通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面的接种方法；若要长期保存纯化后的菌种，可以采用甘油管藏的方法；稀释涂布平板法可用于活菌的计数是因为培养基表面的一个菌落来源于样品中的一个活菌；

（3）利用凝胶色谱法分离大肠杆菌蛋白质时正确的加样顺序是调整缓冲液面、滴加透析样品、演那个品渗入凝胶床、再调整缓冲液面，故顺序为②③④①；SDS凝胶电泳装置是垂直的装置，此种电泳方法主要取决于蛋白质分子量的大小，与电荷无关，同时加样在“-”极，通电后，样品蛋白质向“+”极移动，分子量相对小的，移动距离大，因此从图二的电泳结果分析，P比N、M移向“+”距离大，说明P的分子量相对比较小，因此洗脱出来的时间比较长，符合图三中的丙。