Question

淀粉酶是工业生产上用途最广、产量最大的酶制剂产品之一。为了提高淀粉酶的生产水平，首先要从土壤中筛选出产淀粉酶的活性菌株。某研究人员对所取土样进行产淀粉酶的细菌的分离操作(A 组)和计数操作(B 组)，过程如图Ⅰ。请回答下列问题：

（1）步骤①取土样用的小铁铲和盛土样的信封在使用前都需要__________(填操作)，步骤④ 所用培养基的碳源是__________；步骤⑤所用固体培养基的制备步骤是计算→_________→溶化→ 灭菌→倒平板；步骤⑤⑧接种时需设置未接种培养基做对照，目的是_________。

（2）步骤⑦中，将 1mL 菌液分别稀释 10 倍和 100 倍，每种稀释度经过步骤⑧各在 3 个平板上接种(每个平板的接种量为 0.1mL)，经适当培养后，2 组平板上的菌落数分别为59、57、58 和 2、7、5。据此可得出每升菌液中的活菌数为_________个。

（3）图Ⅱ所用的接种方法_________(填“能”或“不能”)对活菌进行计数；甲、乙、丙为划线的三个区域，为正确完成整个接种过程，接种环至少进行________次灼烧灭菌。

Answer

灭菌 淀粉 称量 检测培养基是否被污染 5.8×106 不能 4

【解析】

1、培养基的制备流程：计算→称量→溶解→调pH值→融化琼脂→滤装→包扎标记→灭菌→摆斜面或倒平板

2、微生物常见的接种的方法：

①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养．在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。

②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。

（1）在微生物培养过程中，获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌入侵，因此步骤①取土样用的小铁铲和盛土样的信封在使用前都需要严格灭菌处理，根据题意可知，该操作过程是从土壤中筛选出产淀粉酶的活性菌株，因此步骤④所用培养基为选择培养基，故所用的碳源是以淀粉为唯一碳源；根据培养基的配制流程：计算→称量→溶解→调pH值→融化琼脂→滤装→包扎标记→灭菌→摆斜面或倒平板；步骤⑤⑧接种时需设置未接种培养基做对照，目的检测检测配制的培养基是否合格，即是否有杂菌污染。

（2）稀释涂布平板法中，一般选用30―300个菌落数进行计数，因此采用稀释10倍和100倍的菌落数分别为59、57、58 和 2、7、5的进行计算，据此可得出每升土壤溶液中的活菌数为：（59+57+58）÷3×10×（0.1×10-3）=5.8×106个。

（3）识图分析可知，图Ⅱ所用的接种方法为平板划线法，用该方法可以将微生物分离获得单个菌落，但是不能对活菌进行计数；图中甲、乙、丙为划线的三个区域，说明进行了三次划线操作，接种过程中接种环首先要进行灼烧灭菌，冷却后沾取菌种进行第一次划线，然后在灼烧接种环，冷却后在第一次划线的末端开始第二次划线，以此类推，因此为正确完成整个接种过程，接种环至少进行4次灼烧灭菌。