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血管内皮生长因子(VEGF)是在肿瘤细胞中通过表达,分泌到血液中的蛋白类生长因子...

血管内皮生长因子(VEGF)是在肿瘤细胞中通过表达,分泌到血液中的蛋白类生长因子,促进肿瘤血管的生成,进而为肿瘤组织生长提供足够的氧气和营养物质。

研究人员利用pVAX1质粒和VEGF基因构建了PVAX1—VEGFDNA疫苗,为肿瘤免疫治疗奠定基础。回答下列问题:

1)首先从人的肺癌细胞株A549中提取mRNA,通过_______法获得VEGF基因。

2)对获取的VEGF基因进行PCR扩增前,需要根据VEGF基因序列设计两种引物,其原因是_________。为便于VEGF基因与质粒pVAX1连接,引物中要增加适当的__________。扩增时,每个循环一般需要经过“变性、退火、延伸”三个过程,其中______过程的温度设定是扩增成败的关键。

3)构建的PVAX1—VEGF上应含有特定的______(填“复制原点”或“启动子”或“标记基因”),它能被受体细胞的_______所识别,以便于催化转录过程。

4DNA疫苗制备简单,价格低廉,且免疫强度高,应答持久,但同时也可能存在着不可忽视的潜在危险。你认为可能存在的潜在危险是________________

 

反转录法 基因的两条反向平行的链都做模板,其碱基序列不同 不同限制酶酶切位点 退火 启动子 RNA聚合酶 DNA疫苗注入体内后,可能整合到宿主基因组上,导致细胞发生变异,使细胞功能异常 【解析】 基因工程技术的基本步骤: (1)目的基因的获取:方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。 (2)基因表达载体的构建:是基因工程的核心步骤,基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。 (3)将目的基因导入受体细胞:根据受体细胞不同,导入的方法也不一样.将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法;将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法;将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。 (4)目的基因的检测与鉴定:分子水平上的检测:①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术;②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术;③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术.个体水平上的鉴定:抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。 (1)通过提取mRNA获得VEGF基因的方法称为反转录法。 (2)基因的两条反向平行的链都做模板,其碱基序列不同,故对目的基因进行PCR扩增前,需要根据目的基因序列设计两对引物。为便于VEGF基因与质粒pVAX1连接,引物中要增加适当的不同限制酶酶切位点,可以防止目的基因和质粒的自身环化和反接。PCR扩增过程中,退火过程的温度设定是扩增成败的关键,温度太低不能解旋,温度太高酶容易失活。 (3)构建的基因表达载体应含有特定的启动子,它能被受体细胞的RNA聚合酶所识别,以便于催化转录过程。 (4)DNA疫苗制备简单,价格低廉,且免疫强度高,应答持久,但DNA疫苗注入体内后,可能整合到宿主基因组上,导致细胞发生变异,使细胞功能异常,故也可能存在着不可忽视的潜在危险。
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阿尔茨海默病(AD)是一种严重的中枢神经系统退行性疾病。AD患者的神经细胞外β淀粉样蛋白()沉积,会损坏周围神经细胞膜和线粒体膜,从而导致神经元发生过劳死。淀粉样前体蛋白(APP)的酶切片段被分泌到细胞外发挥功能,其中一段会形成,因此以往研究更多关注在上,然而针对研发的药物在近年均被证明无效。为寻找阿尔茨海默病的新治疗途径,研究者希望通过实验了解APP其他酶切片段(比如sAPPα)的生理功能。回答下列问题:

1)由于APP蛋白集中表达于神经元突触部位,研究者推测,分泌的sAPPα可能与突触部位细胞表面的__________结合,进而影响神经调节。

2)为研究sAPPα神经元电信号的影响,将体外培养的自身不表达APP蛋白的神经元分成两组,实验组细胞的培养基中加入sAPPα,对照组细胞的培养基中不加sAPPα,两组神经元电信号的变化如下图1所示,分析可知,sAPPα_______(填“促进”或“抑制”)了神经元电信号频率。进一步研究显示,sAPPα通过图2所示途径影响神经元之间的信号传递。分析图2可知,sAPPα的作用机理是_____________

3)研究发现,sAPPα中一个由17个氨基酸组成的多肽片段(APPl7mer)就具有sAPPα的生理功能。为验证该多肽片段在生物个体水平是否有效,有人利用同一批正常小鼠设计了以下实验方案:

组别

实验处理

检测

实验组

给小鼠注射一定量的人工合成的多肽片段(APP17mer)溶液

分别检测实验组和对照组给小鼠海马神经元的电信号

对照组

小鼠注射等量的生理盐水

 

该实验方案存在的缺陷是_____________;对本实验方案的改进是______________

 

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潮上带是指位于平均高潮线与最大涨潮线之间的区域,正常潮汐作用不能到达;潮间带是指平均最高潮位和最低潮位间的海岸,即涨潮时淹没退潮时露出水面的范围。黄河三角洲滨海湿地潮间带土壤盐渍化严重,植物物种多样性非常低,潮上带土壤盐渍化相对较轻,芦苇是该区域的优势种(主要通过无性方式繁殖),但其遗传多样性相对较低。回答下列问题:

1)调查黄河三角洲潮上带群落丰富度应当采用_________法,芦苇植被不但为昆虫、水鸟等动物提供栖息生境和食物来源,而且也是重要的造纸原料,这体现了生物多样性的__________价值。

2)尝试写出芦苇群体的遗传多样性相对较低的可能原因_____________

3)研究人员根据调查推测,潮上带生物群落可能会发生较快的演替,该推测的依据是_____________________

4)提出黄河三角洲滨海湿地芦苇植被的保护措施____________(写出一条即可)。

 

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大麻是一种雌雄异株的植物,其性别决定类型为XY型。该种植物的花色有红色和白色之分,由常染色体上的等位基因(Aa)控制;抗性有不抗病和抗病之分,其中抗病对不抗病为显性。一株红花抗病雌株与一株红花不抗病雄株杂交,F1表现型及比例为红花抗病∶白花抗病∶红花不抗病∶白花不抗病=2121。分析回答问题:

1)通过分析可以确定花色中显性性状是____________。上述实验中F1红花大麻所占比例为23的原因最可能是_____________。若让F1中的雌雄植株连续多代随机交配,后代中A的基因频率会___________(填“升高”或“降低”或“不变”)。

2)上述实验不能确定抗性基因(Rr)只位于X染色体上(不考虑XY染色体的同源区段),理由是___________。要确定该对基因的位置,应选用F1表现型为___________的亲本作为最佳组合,若结果出现_____________,则说明该对基因只位于X染色体上。

3)进一步研究发现,该种大麻基因Aa所在的同源染色体上还存在一对控制缺刻叶和圆叶的等位基因(Ff),其中控制缺刻叶的显性基因纯合致死。请根据以上信息,设计一个杂交实验构建一个大麻品系,该品系无论种植多少代,A的基因频率保持不变_____________。(简要写出实验思路)

 

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高温干旱是影响我国北方沙漠化地区植物生长的两个主要因素,某研究小组利用花花柴作为实验对象,分别测定了三种环境(绿地常温、绿地高温、沙漠高温)一天中五个时间点花花柴的净光合速率,来研究高温干旱对沙漠植物光合作用的影响(如下图)。请据图分析回答:

1)本实验中的自变量为__________,实验中的对照组为____________

2)图中11时到19时,在绿地常温和绿地高温下净光合速率均呈现______的趋势,而沙漠高温组的净光合速率则相反。由此分析,花花柴能适应沙漠高温环境的原因是_______________________

3)经测定,在高温干旱条件下,细胞质中可溶性蛋白、可溶性糖和脯氨酸等物质的含量增加,其意义是________________________

 

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草莓皱缩病毒(SCV)感染草莓时,会使其叶片扭曲皱缩,植株矮化,导致减产。为了能快速有效检测出该病毒,研究人员利用SCV的病毒粒子免疫健康小鼠,制备相应的单克隆抗体。下列有关叙述错误的是(   

A.从免疫小鼠体内分离获得的B细胞,可原代培养至10代左右

B.在获得能分泌相应抗体的杂交瘤细胞的过程中,需要进行两次筛选

C.用单克隆抗体检测草莓是否感染SCV是利用了抗原抗体杂交的原理

D.在制备单克隆抗体的过程中,用到了动物细胞融合技术和动物细胞培养技术

 

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