Question

为解决塑料袋（化学成分为聚乙烯）造成的白色污染，某研究小组试图从土壤中寻找一种能加速塑料袋自然降解过程的目的菌，以下为该研究小组从土壤中寻找并筛选目的菌的流程，请回答问题：

（1）对培养基灭菌常用的方法是________。在接种前需要检测使用的培养基是否被污染，方法是________。

（2）图中①表示对土壤悬浮液进行一系列的________，目的是使聚集在一起的微生物分散成单个细胞，从而能在Ⅰ号培养基表面形成单个菌落。在实验中，研究者每隔24小时统计一次菌落数目，并选取菌落数目稳定时的记录作为结果，这样可以防止________。

（3）Ⅰ号培养基属于________培养基（按功能分），其作用是使目的菌能“脱颖而出”，如图采用的接种方法为________。

（4）假设该同学发现Ⅰ号培养基上菌落数目过多连成一片，说出一种可能的原因并提出合理的处理措施。

原因________________；措施：________________。

Answer

高压蒸汽灭菌法 将未接种的培养基在适宜温度的恒温箱中倒置培养一段时间（或1～2 d），观察是否有菌落生成 梯度稀释 因培养时间不足导致遗漏细菌数目 选择 稀释涂布平板法 菌液浓度过高（或稀释倍数不够） 可以通过增大稀释倍数解决

【解析】

1、无菌操作技术有消毒和灭菌，消毒有煮沸消毒法、巴氏消毒法和化学药剂消毒法，灭菌有灼烧灭菌法适用于接种工具、干热灭菌法适用于玻璃器皿和金属工具、高压蒸汽灭菌法适用于培养基及容器的灭菌。
2、接种最常用的方法是平板划线法和稀释涂布平板法，平板划线分离法：由接种环以菌操作沾取少许待分离的材料，在无菌平板表面进行平行划线、扇形划线或其他形式的连续划线，微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少，并逐步分散开来，如果划线适宜的话，微生物能一一分散，经培养后，可在平板表面得到单菌落。
稀释平板计数是根据微生物在固体培养基上所形成的单个菌落，即是由一个单细胞繁殖而成这一培养特征设计的计数方法，即一个菌落代表一个单细胞。计数时，首先将待测样品制成均匀的系列稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开，使成单个细胞存在（否则一个菌落就不只是代表一个细胞），再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内。

（1）培养基常采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌。在接种前需要检测使用的培养基是否被污染，可以将未接种的培养基在适宜温度的恒温箱中培养一段时间，观察是否有菌落生成，若有菌落生成，则已经被污染，否则没有被污染。

（2）图中①表示对土壤悬浮液进行一系列的梯度稀释，目的是使聚集在一起的微生物分散成单个细胞，从而能在Ⅰ号培养基表面形成单个菌落。在实验中，研究者每隔24小时统计一次菌落数目，并选取菌落数目稳定时的记录作为结果，这样可以防止因培养时间不足导致遗漏细菌数目。

（3）要筛选能降解聚乙烯塑料的微生物，应选择以聚乙烯塑料为唯一碳源的选择培养基。图Ⅰ号培养基上采用的接种方法为稀释涂布平板法。

（4）如果培养基上细菌数目过多连成一片，可能的原因是菌液浓度过高或操作过程不是无菌操作，还可能是接种时没有把细菌分散开，采取的措施有：可以通过增大稀释倍数解决（或培养过程中被杂菌污染；严格无菌操作程序。或利用接种针划线时，划下一个区域前没有对接种针灭菌处理；每划一个新的区域都要对接种针进行灭菌处理）。