Question

研究发现一些嗜冷细菌产生的蛋白酶可使乳蛋白分解，导致牛奶变质。为了筛选检测变质牛奶中的嗜冷细菌，某研学小组做了如图所示实验。(注:培养皿旁的数字代表菌落数目)，请回答下列问题：

（1）牛奶饮用前要经过巴氏消毒，以杀死有害微生物，与煮沸消毒相比，巴氏消毒的牛奶在常温（约28℃）下保存时间较短，原因是__________,导致牛奶中营养成分被分解而变质。

（2）若要筛选嗜冷细菌，应将牛奶样品稀释液接种在以_________为唯一氮源的固体培养基上，并且在______的环境条件下培养，以利于嗜冷细菌生长，抑制或阻止其他微生物的生长。

（3）据图分析,研学小组采用的是________________法分离和计数嗜冷细菌。

（4）用上述方法统计样本中菌落数时是否需要设置对照组？_______（填“需要”或“不需要”），其原因是___________________________________。

（5）按照菌落计数的要求，据图可得出1ml牛奶样品中嗜冷细菌的活菌数为__________个，与用血球计数板相比，此计数方法测得的细菌数目较_______。

Answer

（巴氏消毒的）牛奶中没有被杀死的微生物（或细菌）在适宜温度（或常温）下大量繁殖 乳蛋白 低温（或较低温度） 稀释涂布平板 需要 需要证明（或判断）培养基是否被杂菌污染（培养基灭菌是否合格） 3.9×105 少

【解析】

灭菌是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所用的微生物（包括芽孢和孢子），常用的方法主要有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌，适用对象主要有接种环、接种针、玻璃器皿、培养基等。消毒是指使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物（不包芽孢和孢子），常用的方法主要有煮沸消毒法、巴氏消毒法、化学药剂消毒法、紫外线消毒法，适用对象主要有操作空间、某些液体、双手等。稀释涂布平板法常用来进行微生物的计数。

（1）由于巴氏消毒的温度为75~80°C之间，有些微生物在此温度下没有被杀死，故在适宜温度（或常温）下，（巴氏消毒的）牛奶中没有被杀死的微生物（或细菌）会大量繁殖，导致牛奶中营养成分被分解而变质。所以巴氏消毒的牛奶在常温（约28℃）下保存时间较短。

（2）由于嗜冷细菌产生的蛋白酶可使乳蛋白分解，故要筛选嗜冷细菌，应将牛奶样品稀释液接种在以乳蛋白为唯一氮源的固体培养基上，并且在低温的环境条件下培养，以利于嗜冷细菌生长，抑制或阻止其他微生物的生长。

（3）根据图示中将牛奶样品稀释后涂在培养基上进行菌落计数，可知研学小组采用的是稀释涂布平板法分离和计数嗜冷细菌。

（4）由于不知道制备的培养基是否被污染，故需要设置不接种微生物的培养基进行对照，以证明（或判断）培养基是否被杂菌污染（培养基灭菌是否合格）。

（5）菌体计数时应选择菌落数在30~300之间的稀释倍数进行计数，由图中菌落数量可知，应选择稀释103的进行计数，故1ml牛奶样品中嗜冷细菌的活菌数为（36+39+42）÷3÷0.1×103=3.9×105个。该种方法计数时，计数的是活菌的数量，且当两个或多个菌体连在一起生长时，平板上观察的只是一个菌落，故与用血球计数板相比，此计数方法测得的细菌数目较小。