Question

为了分离和纯化高效分解石油的细菌，科研人员利用被石油污染过的土壤进行了如图A 所示的实验。

（1）步骤③的培养基成分与普通液体培养基相比，最大的区别是步骤③培养基中____________。从功能上讲，步骤③中使用的培养基属于____________培养基。

（2）同学甲进行步骤④的操作，其中一个平板经培养后的菌落分布如图B所示。该同学的接种方法是_________，出现图B结果可能的失误操作是____________。纯化菌株时，还可釆用平板划线法。划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌，第二划线区域的第一条线上无菌落，其它划线上有菌落。造成划线无菌落可能的操作失误有____________。

（3）同学乙也按照同学甲的接种方法进行了步骤④的操作：将lmL样品稀释100倍，在3 个平板上分别接入0．lmL稀释液；培养后，3个平板上的菌落数分别为56、58和57。据此可得出每升样品中的活菌数为____________个。

（4）步骤⑤需要振荡培养，原因是____________。

（5）步骤⑤后取样测定石油含量的目的是____________。

Answer

石油是唯一碳源 选择培养基 稀释涂布平板法 涂布不均匀 接种环灼烧后未冷却；划线未从第一区域末端开始 5.7×107 提高培养液中（溶解）氧的含量 筛选出分解石油能力最强的细菌

【解析】

1.微生物常见的接种的方法：

①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养．在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。

②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。

2.分析图B：图B采用的是稀释涂布平板法，但涂布不均匀。

（1）对培养基和培养器皿要进行灭菌处理，对操作者的双手需要进行清洗和用酒精消毒；步骤③与步骤②中培养基成分相比，最大的区别是石油是唯一碳源，用以筛选高效分解石油的细菌。从功能上讲属于选择培养基。

（2）同学甲进行步骤④的操作，其中一个平板经培养后的菌落分布如图B所示，菌落密集处呈片状分布，说明该同学的接种方法是稀释涂布平板法，涂布平板时只能取少量菌悬液滴加到培养基表面，菌悬液量过多会导致菌体堆积，影响分离效果。出现图B结果可能的操作失误是涂布不均匀。划线接种时，在第一区域划线后须将该工具灼烧灭菌后再划线，在第二次划线时须从第一次划线的末端开始，这样做的目的是将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基上。划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌，第二划线区域的第一条线上无菌落，其它划线上有菌落，造成划线无菌落可能的操作失误有①接种环灼烧后未冷却；②划线未从第一区域末端开始。

（3）同学乙也按照同学甲的接种方法进行了步骤④的操作：将1mL样品稀释100倍，在3个平板上分别接人0.1mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为56、58和57。据此可得出每升样品中的活菌数为（56+58+57）÷3÷0.1×1000×100=5.7×107个．

（4）步骤⑤需要振荡培养，原因是提高培养液中（溶解）氧的含量，通过振荡可使菌体与培养液充分接触，提高营养物质的利用率。

（5）步骤⑤后取样测定石油含量的目的是筛选出分解石油能力最强的细菌。