Question

生物柴油是一种可再生清洁能源，其应用在一定程度上能够减缓人类对化石燃料的消耗。科学家发现，在微生物M产生的脂肪酶的作用下，植物油与甲醇反应能够合成生物柴油（如下图）。

（1）欲分离筛选出能分泌脂肪酶的细菌，应配制_____碳源的培养基，这种培养基从功能上看属于____培养基。

（2）在微生物培养过程中，灭菌与消毒的主要区别是灭菌能够杀死物体内外______。常用______法对玻璃器皿进行灭菌。

（3）经过稀释，在平板上接入0．1mL稀释液并涂布，经适当时间培养后，在平板上计数菌落，据此可计算出每毫升培养液中的活菌数。这种计数方法得到的结果一般比实际值偏小，原因可能有______________________________。

（4）经上述实验发现稀释倍数为10¹、10²、10³、10⁴、10⁵、10⁶得到的结果分别为难以计数、难以计数、难以计数、159、17、2，为保证结果准确，一般选择_____稀释倍数的平板进行统计。

（5）为降低生物柴油生产成本，可利用__________技术使脂肪酶能够重复使用。

Answer

以脂肪为唯一 选择 所有的微生物的芽孢和孢子 干热灭菌 有的菌落是由2个以上的细菌形成的、涂布器上还残留少量细菌 104 固定化酶

【解析】

1、微生物的营养物质主要有碳源、氮源、水和无机盐等，筛选菌株时需要用选择培养基；实验室中筛选微生物的原理是人为提供有利于目的菌生长的条件，同时抑制或阻止其他微生物生长。

2、微生物常见的接种的方法

①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。

②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。

（1）欲分离筛选出能分泌脂肪酶的细菌，应配制以脂肪为唯一碳源的培养基；由于只要能分解脂肪的微生物能在这种培养基上生存，因此从功能上看，其属于选择培养基。

（2）在微生物培养过程中，灭菌和消毒的主要区别是灭菌能够杀死物体内外所有的微生物的芽孢和孢子，玻璃器皿常采用的灭菌方法为干热灭菌。

（3）采用稀释涂布平板法得到的结果一般比实际值偏小，原因可能是有的菌落是由2个以上的细菌形成的、涂布器上还残留少量细菌。

（4）根据题干中数据可知，稀释倍数为104时，培养基中菌落能通过肉眼进行计数，且数目在30-300之间，因此为保证结果准确，一般选择104稀释倍数的平板进行统计。

（5）为降低生物柴油生产成本，可利用固定化酶技术使脂肪酶能够重复使用。