Question

常见的酿酒酵母只能利用葡萄糖而不能利用木糖来进行酒精发酵，而自然界中某些酵母菌能利用酶A分解木糖产生酒精。请分析回答下列问题：

（1）在制备含琼脂的培养基和倒平板的过程中，下列选项需要的是________（填序号）。

①酒精灯    ②接种环    ③高压蒸汽灭菌锅    ④培养皿

（2）将自然界收集的酵母菌菌株转接到仅以______为碳源的培养基中，_______（填“有氧”或“无氧”）条件下培养一周后，有些酵母菌死亡，说明这些酵母菌不能利用木糖发酵。

（3）将搜集到的酵母菌放入培养液中扩大培养后，用稀释涂布平板法计算每克样品中的菌株数的公式为（C÷V）×M，其中C代表______。对于需要长期保存的菌种，可以采用___________的方法。           

（4）纯化后的酶A可以用电泳法检测其分子量大小。在相同条件下，带电荷相同的蛋白质电泳速度越快，说明_____________。       

（5）生产上常将酶A固定化以反复利用。部分操作如下：将酶A固定在_______（“溶于水”或“不溶于水”）的载体上，将其装入反应柱内后，需用蒸馏水充分洗涤固定化酶柱，以除去未吸附的酶 A。一般来说，酶不适合采用__________法固定化。

Answer

①③④ 木糖 无氧 某一稀释度下平板上生长的平均菌落数 甘油管藏 其分子量越小 不溶于水 包埋

【解析】

1、微生物常见的接种方法：
①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。
②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。
2、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基：
（1）计算：依据是培养基配方的比例。
（2）称量：牛肉膏比较黏稠，可同称量纸一块称取。牛肉膏和蛋白胨易吸潮，称取时动作要迅速，称后及时盖上瓶盖。
（3）溶化：牛肉膏和称量纸+水加热取出称量纸→加蛋白胨和氯化钠→加琼脂（注意：要不断用玻璃棒搅拌，防止琼脂糊底而导致烧杯破裂）→补加蒸馏水至100mL。
（4）调pH；
（5）灭菌：培养基采用高压蒸汽灭菌，培养皿采用干热灭菌。
（6）倒平板。
3、菌种保存：进行菌种保藏时，若采用临时保藏，将菌种接种在斜面培养基上，放入4℃冰箱中可保藏3～6个月；若要长期保存，可将菌液与灭菌的甘油混匀，放在-20℃的冰箱中保存一年。

（1）①制备培养基的相关操作需要在酒精灯火焰旁进行，①正确；②制备培养基时不需要接种环，②错误；③培养基需要用高压蒸汽灭菌锅进行灭菌，③正确；④制备培养基时需要培养皿，④正确。故选：①③④。
（2）常见的酿酒酵母只能利用葡萄糖而不能利用木糖来进行酒精发酵，而自然界中某些酵母菌能利用酶A分解木糖产生酒精，故可将自然界收集的酵母菌菌株转接到仅以木糖为碳源的培养基中，在无氧条件下培养一周后，有些酵母菌死亡，说明这些酵母菌不能利用木糖发酵。

（3）将收集到的酵母菌放入培养液中扩大培养后，用稀释涂布平板法计算每克样品中的菌株数公式为（C÷V）×M，其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数。V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（mL），M代表稀释倍数。由分析可知，对于需要长期保存的菌种可采用甘油管藏法。
（4）电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小、形状的不同，使带电分子产生不同的迁移速度，从而实现样品中各种分子的分离。故纯化后的酶A可以用电泳法检测其分子量大小。在相同条件下，带电荷相同的蛋白质电泳速度越快，说明其分子量越小。

（5）生产上常将酶A固定化以反复利用。部分操作如下：将酶A固定在不溶于水的载体上，将其装入反应柱内后，需用蒸馏水充分洗涤固定化酶柱，以除去未吸附的酶A。因为酶分子较小，一般来说，不适合采用包埋法固定化。