Question

某质粒上有SalⅠ、HindⅢ、BamHⅠ三种限制酶切割位点，同时还含有抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因。利用此质粒获得转基因抗盐烟草的过程如图所示，请回答下列问题：

（1）从基因文库中获得的抗盐基因可用PCR技术进行扩增，将__________、__________、四种游离的脱氧核苷酸、Taq酶投入仪器中DNA分子可以进行指数扩增。

（2）在构建重组质粒时，应选用图中__________两种限制酶，目的是：_____________。

（3）将目的基因导入烟草常用__________法，该方法是利用了农杆菌___________特点。

（4）为了确定抗盐烟草培育成功，既要用放射性同位素标记的_____________作探针进行分子杂交检测，又要用____________________的方法从个体水平鉴定烟草植株的耐盐性。

Answer

模板DNA 引物 SalI，HindIII 以保证重组DNA序列的唯一性 农杆菌转化法 Ti质粒的T-DNA可转移到受体细胞，并整合到受体细胞的染色体DNA上 目的基因（抗盐基因） 一定浓度的盐水浇灌烟草植株

【解析】

根据题意和图示分析可知：质粒和含抗盐基因的DNA片段上均有SalⅠ、HindⅢ、BamHⅠ三种限制性核酸内切酶酶切位点；

在质粒上，这三种限制酶的切割位点都位于抗四环素基因上，用其任何一种酶都会破坏四环素抗性基因；在含抗盐基因的DNA片段上，BamHⅠ位于目的基因上，用BamHⅠ切割会破坏目的基因。

（1）PCR技术进行扩增需要将模板DNA、引物、四种游离的脱氧核苷酸、Taq酶投入仪器中DNA分子可以进行指数扩增。

（2）质粒和含有目的基因的外源DNA分子上都含有SalI、Hindm、BamHI三种限制酶切割位点，其中BamHI的切割位点位于目的基因上，用该酶切割会破坏目的基因；若只用SalI一种限制酶切割可能会导致目的基因与运载体反向连接；因此在构建重组质粒时，应选用SalI和HindIII两种限制酶对质粒和抗盐基因进行切割，以保证重组DNA序列的唯一性。

（3）将目的基因导入植物细胞采用最多的方法是农杆菌转化法，利用了农杆菌的Ti质粒的T-DNA可转移到受体细胞，并整合到受体细胞的染色体DNA上特点。

（4）探针是指用放射性同位素标记的目的基因（抗盐基因），除了从分子水平上进行检测，还可以从个体水平上进行鉴定，即用一定浓度的盐水浇灌烟草植株来鉴定烟草的耐盐性。