Question

研究发现，许多癌细胞表面会出现高亲和力的促性腺激素释放激素（LHRH）受体。某研究所构建了一种导向治疗癌症的药物﹣﹣重组人促性腺激素释放激素﹣绿脓杆菌外毒素A融合蛋白（LHRH﹣PE40），目前已完成临床前研究。 

（1）促性腺激素释放激素（LHRH）由________分泌，与相关垂体细胞膜表面的________特异性结合并调节其细胞分泌促性腺激素，进而调节相关腺体的激素分泌，该过程体现了激素分泌的________调节。

（2）绿脓杆菌外毒素A（PEA）是绿脓杆菌的主要毒力因子，它必须在进入细胞后才发挥毒性作用，杀死细胞。PEA有PEA受体结合区、越膜区和毒性区三个功能区。LHRH﹣PE40是利用基因工程的方法将LHRH基因和去除________区的所对应的基因片段在体外重组后，导入大肠杆菌表达产生的。

（3）为了研究LHRH﹣PE40与人结肠癌细胞膜蛋白特异性结合的最适加入量。科研人员用I标记的LHRH﹣PE40和人结肠癌细胞膜蛋白进行结合实验。结果如下图所示。

注：﹣▲﹣TB：I﹣LHRH﹣PE40与癌细胞膜蛋白的总结合量

﹣■﹣NB：I﹣LHRH﹣PE40与癌细胞膜蛋白的非特异性结合量（非特异性结合是指激素结合到受体蛋白除特异性结合位点之外的其它部位）。

据图分析可知_LHRH﹣PE40可作为其与人结肠癌细胞膜蛋白特异性结合的最适加入量是________万CPM，作出此判断的依据是________。

（4）为了进一步验证：“LHRH﹣PE40特异性结合的对象为LHRH受体”，科研人员以人结肠癌细胞膜蛋白作为实验材料，并先后添加相关药品进行实验。（注：药品A﹣D均溶于E）

A．I﹣LHRH    B．LHRH﹣PE40    C．LHRH    D．LHRH受体    E．缓冲液

分组	先加药品	后加药品	测量指标
实验组	药品1	药品3	检测膜蛋白与药物结合后的放射性
对照组1	E
对照组2	药品2

①药品1、2、3分别是________________________（填字母）。

②若实验结果为___________________________________________，则证明“LHRH﹣PE40特异性结合的对象为LHRH受体”的说法正确。

Answer

下丘脑 受体 分级调节 PEA受体结合 80 LHRH-PE40与癌细胞膜蛋白的总结合量增加明显，而LHRH-PE40与癌细胞膜蛋白的非特异性结合量增加较少，且总结合量与非特异性结合量差值较大 B C A 实验组的放射性和对照组2大致相同，且明显低于对照组1

【解析】

性激素的分泌为分级调节，由下丘脑合成并分泌促性腺激素释放激素，作用于垂体，使垂体合成并分泌促性腺激素，作用于性腺，使性腺分泌性激素增加。分析图示可知当放射性标记物加入量较低时，总结合量与非特异性结合量差值不大，在放射性标记物加入量为80万CPM时，能保证在加入量最少的情况下，总结合量与非特异性结合量差值最大，但随着射性标记物加入量增大时，总结合量与非特异性结合量差值变化不大。

（1）促性腺激素释放激素（LHRH）由下丘脑分泌，通过血液运输，与相关垂体细胞膜表面的特异性受体结合并调节其细胞分泌促性腺激素，进而调节性腺分泌性激素，该过程体现了激素分泌的分级调节。
（2）PEA有PEA受体结合区、越膜区和毒性区三个功能区。LHRH-PE40是利用基因工程的方法将LHRH基因和去除PEA受体结合区的所对应的基因片段在体外重组后，导入大肠杆菌表达产生的。
（3）据图可知，在放射性标记物加入量为80万CPM时，LHRH-PE40与癌细胞膜蛋白的总结合量增加明显，而LHRH-PE40与癌细胞膜蛋白的非特异性结合量增加较少，且总结合量与非特异性结合量差值较大，故I-LHRH-PE40可作为其与人结肠癌细胞膜蛋白特异性结合的最适加入量是80万CPM。
（4）①该实验的目的是进一步验证“LHRH-PE40特异性结合的对象为HRH受体”故实验组中应加入药品 LHRH-PE40，对照组2中加入等量的LHRH，对照组1中可加等量的溶剂E，然后三组均加入相同的I-LHRH。

②若LHRH-PE40 特异性结合的对象与LHRH结合的对象一样为LHRH受体，则实验组和对照组2中的肠癌细胞膜蛋白与I-LHRH结合的将减少，所以若实验组的放射性和对照组2大致相同，且明显低于对照组1，则可证明LHRH-PE40特异性结合的对象为LHRH受体。