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是基因工程中常用的质粒运载体,其结构如图(其中HindⅢ、PstⅠ、EcoRⅠ等...

是基因工程中常用的质粒运载体,其结构如图(其中HindⅢPstⅠEcoRⅠ等限制酶的识别位点之间的碱基对数忽略不计,lacZ是显色基因)。

现将扩增的含目的基因的外源DNA片段与pUC18质粒都用PstI进行酶切,然后用DNA连接酶进行连接,构建重组质粒.为筛选非重组子和重组子,分别用不同的限制酶进行酶切.经琼脂糖凝胶电泳结果如图1(1kb=1000对碱基).请据图分析回答:

1)与pUC18质粒重组的目的基因大小为________

2)用kpnⅠ酶切pUC18质粒,产生了12.7kb的带;用kpnⅠ酶切重组质粒,产生了2条带,但有3.0kb+3.7kb1.0kb+5.7kb两组数据(图2).下列说法中合理的是________

A.重组质粒中有两个kpnⅠ的酶切位点,且其中一个位于目的基因的区段

B.重组质粒中有两个kpnⅠ的酶切位点,都位于目的基因的区段

C.产生两种酶切的结果,推测是目的基因与开环的pUC18拼接时有两种可能的插入方向

D.产生两种酶切的结果,推测是另有一种限制酶的酶切位点的碱基序列与kpnⅠ相同

3)请在目的基因上标注kpnⅠ酶切位点(需注明目的基因的碱基对数量及kpnⅠ酶切位点两侧的碱基对数量)_______

4)大肠杆菌pUC18质粒的LacZ基因中如果没有插入外源基因,lacZ基因便可表达出β-半乳糖苷酶,当培养基中含有IPTGX-gal时,X-gal便会被β-半乳糖苷酶水解成蓝色,大肠杆菌将形成蓝色菌落.反之,则形成白色菌落.选择培养基中除含有大肠杆菌必需的葡萄糖、氮源、无机盐、水、生长因子等营养物质外,还应加________________________入物质。成功导入重组质粒的大肠杆菌在培养基中形成________颜色的菌落,原因是________

 

4 AC X-gal IPTG 氨苄青霉素 白色 lacZ基因被插入目的基因而失活 【解析】 分析题图:用HindⅢ或EcoRⅠ切割后,pUC18质粒只产生1条2、7kb的带,重组子产生了2条带,即4.0kb和2.7kb,非重组子产生1条带,即2.7kb。用kpnⅠ酶切pUC18质粒,产生了1条2.7kb的带;用kpnⅠ酶切重组质粒,产生了2条带,但有3.0kb+3.7kb或1.0kb+5.7kb两组数据,说明重组质粒中有两个kpnⅠ的酶切位点,且其中一个位于目的基因的区段,产生两种酶切的结果的原因可能是目的基因与开环的pUC18拼接时有两种可能的插入方向。据此答题。 (1)根据图1可知,pUC18质粒的长度是2.7kb,而重组子的长度是2.7+4.0=6.7kb,因此与pUC18质粒重组的目的基因大小为4kb。 (2)AB、pUC18质粒的长度是2.7kb,目的基因大小为4kb,用kpnⅠ酶切重组质粒,产生了2条带,但有3.0kb+3.7kb或1.0kb+5.7kb两组数据,这说明重组质粒中有两个kpnⅠ的酶切位点,且其中一个位于目的基因的区段,A正确,B错误; CD、产生两种酶切的结果,推测是目的基因与开环的pUC18拼接时有两种可能的插入方向,C正确,D错误。 故选AC。 (3)用kpnⅠ酶切重组质粒,产生了2条带,但有3.0kb+3.7kb或1.0kb+5.7kb两组数据,说明重组质粒中有两个kpnⅠ的酶切位点,且其中一个位于目的基因的区段,目的基因上标注kpnⅠ酶切位点如图:。 (4)大肠杆菌pUC18质粒的LacZ基因中如果没有插入外源基因,lacZ基因便可表达出β-半乳糖苷酶,当培养基中含有IPTG和X-gal时,X-gal便会被β-半乳糖苷酶水解成蓝色,大肠杆菌将形成蓝色菌落。反之,则形成白色菌落。培养基中应含有大肠杆菌必需的营养物质包括碳源、氮源、无机盐、水和生长因子。由于质粒上含有氨苄青霉素抗性基因,因此导入质粒的大肠杆菌能抗氨苄青霉素,所以培养基中还应加入氨苄青霉素,作用是筛选出导入pUC18质粒的大肠杆菌,此外培养基中还应加入IPTG、X-gal。重组质粒上的LacZ基因被破坏,不能产生β一半乳糖苷酶,若大肠杆菌中已成功导入了重组质粒,则其在含有IPTG和X-gal的培养基中形成白色菌落。
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考点分析:
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研究发现,许多癌细胞表面会出现高亲和力的促性腺激素释放激素(LHRH)受体。某研究所构建了一种导向治疗癌症的药物﹣﹣重组人促性腺激素释放激素﹣绿脓杆菌外毒素A融合蛋白(LHRHPE40),目前已完成临床前研究。 

1)促性腺激素释放激素(LHRH)由________分泌,与相关垂体细胞膜表面的________特异性结合并调节其细胞分泌促性腺激素,进而调节相关腺体的激素分泌,该过程体现了激素分泌的________调节。

2)绿脓杆菌外毒素APEA)是绿脓杆菌的主要毒力因子,它必须在进入细胞后才发挥毒性作用,杀死细胞。PEAPEA受体结合区、越膜区和毒性区三个功能区。LHRHPE40是利用基因工程的方法将LHRH基因和去除________区的所对应的基因片段在体外重组后,导入大肠杆菌表达产生的。

3)为了研究LHRHPE40与人结肠癌细胞膜蛋白特异性结合的最适加入量。科研人员用I标记的LHRHPE40和人结肠癌细胞膜蛋白进行结合实验。结果如下图所示。

注:﹣TBILHRHPE40与癌细胞膜蛋白的总结合量

NBILHRHPE40与癌细胞膜蛋白的非特异性结合量(非特异性结合是指激素结合到受体蛋白除特异性结合位点之外的其它部位)。

据图分析可知_LHRHPE40可作为其与人结肠癌细胞膜蛋白特异性结合的最适加入量是________CPM,作出此判断的依据是________

4)为了进一步验证:“LHRHPE40特异性结合的对象为LHRH受体”,科研人员以人结肠癌细胞膜蛋白作为实验材料,并先后添加相关药品进行实验。(注:药品AD均溶于E

AILHRH    BLHRHPE40    CLHRH    DLHRH受体    E.缓冲液

分组

先加药品

后加药品

测量指标

实验组

药品1

药品3

检测膜蛋白与药物结合后的放射性

对照组1

E

对照组2

药品2

 

①药品123分别是________________________(填字母)。

②若实验结果为___________________________________________,则证明“LHRHPE40特异性结合的对象为LHRH受体”的说法正确。

 

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1)某医生接待了因手被割伤前来就医的甲、乙两位病人,在详细询问后,决定给接种过破伤风疫苗的甲注射破伤风类毒素;给未接种过破伤风疫苗的乙注射破伤风抗毒素,图1表示人体对接种物免疫的部分过程。数字表示细胞或物质,据图分析回答:

1中,代表破伤风抗毒素的是_____。在这甲、乙两种治疗方法中,免疫见效快、作用维持的时间短的是_____

细胞_____除了能直接消灭抗原外,还能_____

下列关于细胞②③④⑤的说法正确的是_____

A.人体对某些抗原能终身免疫只与细胞有关

B.细胞③④⑤中相同的物质是DNAmRNA和核糖核苷酸

C.受抗原刺激后的②③④细胞,有的细胞周期变长,但核糖体活动都增强

D.只有细胞没有识别能力和分裂分化能力,且能产生特定的免疫物质

2SCID是一种严重免疫缺陷疾病,科学家曾对一名双亲均正常的患病女孩进行临床诊断,发现其致病的主要机理如图2所示(ADA是脱氨基腺苷酶,dATP是双链三磷酸腺苷),最终结果导致细胞发育失常,细胞损伤或死亡.

患者体内ADA(脱氨基腺苷酶)的缺失,对BT淋巴细胞的损伤很大,试根据题意分析原因:_____

 

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材料:科学研究发现植物在光照条件下,进行光合作用的同时发生“光呼吸”作用。光呼吸是所有进行光合作用的细胞在光照和高氧低二氧化碳情况下发生的一个生化过程。它是光合作用一个损耗能量的副反应.具体过程如图所示:

1)通过比较碳固定数发现,有光呼吸发生时,光合作用效率降低了________

2)“光呼吸”之所以发生,是因为酶与大多数酶相比较弱。氧气和二氧化碳都能与酶的活性部位结合而互为抑制剂。

3)在大棚种植蔬菜时可通过采取________措施,降低“光呼吸”作用。

A.延长光照时间     B.补充照明

C.增施有机肥       D.降低温度

4)“光呼吸”作用对于光合作用也有积极意义:当________时,叶绿体内通常会积累和,对叶绿体造成伤害,而光呼吸作用可以消耗多余的和。

5)下列说法正确的是________

A “光呼吸”与“细胞呼吸”一样,都消耗了氧气,释放出二氧化碳

B “光呼吸”第一阶段反应发生在叶绿体中,而细胞呼吸第一阶段反应发生于线粒体中

C “光呼吸”消耗,而细胞呼吸则产生

D “光呼吸”的发生必须要在有光的条件下,而细胞呼吸则与光照条件无关

材料:为研究浮游藻类的光合作用,将一种绿藻培养至指数生长期,并以此为材料,测定了藻细胞在不同条件下的净光合速率.2为光合放氧测定装置的示意图;图3是不同的浓度条件下测得曲线图。

6)通过变换图中光源,可研究________________对光合作用的影响。

7)由于弱碱性的藻培养液中游离浓度很低,藻光合作用主要通过胞内碳酸酐酶分解水中的获得。图中达到最大值的最低浓度为________;在更高浓度下,不再增加的主要环境因素有________________

 

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HIV是一种能直接杀伤T细胞的病毒,由病毒核心和具有糖蛋白的外膜组成。错误的是(   

A.HIV的杀伤作用使T细胞数量减少,导致细胞免疫和体液免疫缺陷

B.HIV感染初期,机体仍然可以通过免疫应答机制阻止HIV的增殖

C.HIV表面糖蛋白与宿主细胞表面受体的结合,属于细胞间的信息交流

D.HIV感染者最终多死于多种病原体引起的严重感染或恶性肿瘤等疾病

 

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某同学为观察植物细胞的质壁分离和复原,将同一植物相同部位的细胞分别置于一定浓度的KNO3溶液和蔗糖溶液中,发生质壁分离后再置于蒸馏水中。实验过程中两组细胞的液泡体积随时间的变化曲线如下图所示。下列相关叙述正确的是(   

A.曲线Ⅰ表示蔗糖组细胞的液泡体积的变化

B.植物细胞自C点开始从外界溶液中吸收溶质分子

C.B点时,水分子进出植物细胞达到动态平衡

D.C点时,液泡体积不变,两组实验中细胞的细胞液浓度相等

 

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