Question

下列关于“淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测”实验的叙述，正确的是

A.淀粉溶液过柱时控制流速，是为了便于接取产物

B.洗涤反应柱时控制流速，是为了防止洗去已固定的淀粉酶

C.实验后用蒸馏水洗涤反应柱，是为了去除已固定的淀粉酶

D.洗涤后的反应柱应高温灭菌，避免微生物分解反应柱中的酶

Answer

B

【解析】

实验的基本步骤：

1、配置可溶性淀粉溶液：取35mg可溶性淀粉溶于50ml沸水。（可溶性淀粉先用冷水调成糊状，再加入沸水中。这样溶解才会形成澄清的溶液）将配置好的淀粉溶液放置在60℃（酶的最适温度50℃~75℃，使后期淀粉酶经过时能达到酶的最高催化活性）的水浴锅（水浴锅中添加去离子水）中备用。

2、α-淀粉酶的固定化：在50ml烧杯中将5mg α-淀粉酶溶于4ml蒸馏水中。（注意：由于酶不纯，可能有些不溶物。）再加入5g石英砂，不时搅拌（搅拌切忌太用力），固定15min。（使酶能吸附到石英砂表面）

3、检验未吸附的游离淀粉酶：小心倒掉上清液后（未吸附的游离淀粉酶应该在上清液中），用10~15ml的蒸馏水小心清洗石英砂2~3次，每次取其上清液0.5ml于试管中，同时滴加淀粉溶液充分混匀。再加入1滴KI-I2溶液，若溶液变为蓝色，说明上清液中已无游离α-淀粉酶，如果溶液为红色，继续用蒸馏水清洗，直至淀粉溶液变为蓝色为止。（检验未吸附的游离淀粉酶是否洗涤干净，每次蒸馏水洗涤都可以使未吸附的游离淀粉酶溶于上清液，而游离淀粉酶可以与加入的淀粉溶液反应，产生的糊精遇碘变红。单纯的淀粉溶液与碘反应会变蓝色。于是不断清洗，直至检验不存在了。）

4、先把滤布（可以考虑滤纸片，使石英砂不从注射器中漏出）放于固定化酶柱中，再装入有α-淀粉酶的石英砂约4ml，装柱过程中可在装有石英砂的烧杯中加入少量蒸馏水（便于石英砂流入层析柱），同时适当打开层析柱的调节装置（使多余的液体流出）。

5、把灌注了固定化酶的层析柱放在支架上，用滴管加淀粉溶液，使淀粉溶液约以0.3ml/min（6滴/min）的流速过柱，在流出1~2ml反应液后（让塑料管中的水流出），转动关闭层析柱的调节装置，放置5min。（充分的反应时间，使后面检测效果明显。）

6、打开调节装置，以0.3ml/min（6滴/min）的流速过柱，流出1~2ml反应液后（让塑料管中的溶液流出），用两支试管分别接收0.5ml流出液，其中一支加入蒸馏水稀释1倍，按以下表格在试管中加入相应试剂，观察结果。

7、固定后的α-淀粉酶可以重复利用，实验后用10倍柱体积的蒸馏水洗涤固定化酶柱，然后放置在4℃冰箱中保存。

A、淀粉溶液过柱时控制流速，是为了让塑料管中的水流出，并充分的反应时间，使后面检测效果明显，A错误；

B、洗涤反应柱时控制流速，是为了让塑料管中的溶液流出并防止洗去已固定的淀粉酶便于接取，B正确；

C、实验后用蒸馏水洗涤反应柱，是为了去除未吸附的游离淀粉酶，C错误；

D、洗涤后的反应柱应高温灭菌，避免微生物分解反应柱中的淀粉，D错误；

故选B。