Question

图甲是从土壤中筛选产脲酶细菌的过程，图乙是脲酶基因转录的 mRNA 部分序列。

（1）图中选择培养基应以____________为唯一氮源；鉴别培养基还需添加____________作指示剂，产脲酶细菌在该培养基上生长一段时间后，其菌落周围的指示剂将变成____________色。

（2）该小组采用稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量。在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是______________________；然后，将 1 mL水样稀释 100 倍，在 3 个平板上用涂布法分别接入 0.1 mL 稀释液；经适当培养后，3 个平板上的菌落数分别为 39、38 和 37。据此可得出每升水样中的活菌数为________。

（3）该小组采用平板划线法分离水样中的细菌，操作时，接种环通过________灭菌，在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线。这样做的目的是___________。

（4）现有一菌株的脲酶由于基因突变而失活，突变后基因转录的 mRNA 在图乙箭头所示位置增加了 70 个核苷酸，使图乙序列中出现终止密码(终止密码有 UAG、UGA 和 UAA)。突变基因转录的 mRNA 中，终止密码为________，突变基因表达的蛋白含________个氨基酸。

Answer

尿素 酚红 红 检测培养基平板灭菌是否合格 3.8×107 灼烧 将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落 UGA 115

【解析】

本题考查分解尿素微生物的分离、培养和鉴别，同时考查了必修的基因突变和基因表达知识，要求考生识记分解尿素微生物的氮源的选择、试剂的种类、掌握微生物计数的方法

（1）据题干信息，要筛选产脲酶细菌的过程，因此培养基中需以尿素为唯一氮源。脲酶将尿素分解产生氨，培养基pH升高，加入酚红指示剂，变为红色，因此鉴别尿素分解菌需在培养基中添加酚红指示剂。

（2）微生物培养过程应该进行无菌操作，配制的培养基要进行高压蒸汽灭菌，可以将灭菌后的空白平板进行培养以检测培养基灭菌是否彻底；由由题意知1ml水样中的菌落数是（39+38+37）÷3÷0.1×100=3.8×104个，每升水样中的活菌数为3.8×104×103=3.8×107。

（3）对接种环常用的灭菌方法是灼烧灭菌；在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线的目的是；将聚集的菌体逐渐稀释分散以便获得由单个细胞繁殖而来的菌落。

（4）mRNA三个相邻碱基决定一个氨基酸，箭头处插入70个碱基，加上紧邻的AG，共决定24个氨基酸，然后出现终止密码UGA，箭头前共273个碱基，决定91个氨基酸，因此突变后的基因表达的蛋白质中含有115个氨基酸。

优点

缺点

适用范围

平板划
线分离法

可以观察菌落特征，对混合菌进行分离

不能计数

适用于好氧菌

稀释涂布
平板法

可以计数，可以观察菌落特征

吸收量较少，较麻烦，平板不干燥效果不好，容易蔓延

适用于厌氧，兼性厌氧