Question

某同学对“血红蛋白的提取和分离“实验进行改进和研究，实验步骤如图1所示。请回答下列问题：

（1）蛋白质的提取和分离一般分为______________________________等四步。

（2）血红蛋白由4条肽链组成，包括______，血红蛋白因含有______而呈红色，这有利于对提取过程的监测。

（3）洗涤红细胞的目的是______。将样品稀释后转移至离心管中，离心后选取______（上层或下层）暗红色的红细胞液体并将其转入烧杯中，加入5倍体积的______进行洗涤。

（4）待红细胞破裂释放血红蛋白后，将得到的混合溶液充分搅拌并离心，结果如图2所示。血红蛋白分布在图2的______（填序号）层，用滤纸过滤，可得到含血红蛋白的滤液。

（5）将滤液装入透析袋中，可除去______的杂质。

Answer

样品处理、粗分离、纯化、纯度鉴定 2条α一肽链和2条β肽链 血红素 去除杂蛋白，以利于血红蛋白的分离和纯化 下层 生理盐水 ③ 分子量较小

【解析】

1、血红蛋白的提取与分离的实验步骤主要有：

（1）样品处理：①红细胞的洗涤，②血红蛋白的释放，③分离血红蛋白溶液。

（2）粗分离：①分离血红蛋白溶液，②透析。

（3）纯化：调节缓冲液面→加入蛋白质样品→调节缓冲液面→洗脱→收集分装蛋白质。

（4）纯度鉴定--SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。

2、将搅拌好的混合液转移到离心管中，离心后，可以明显看到试管中的溶液分为4层，从上向下依次是有机溶剂层、脂类物质层、红细胞破碎物沉淀层，即第三层为红色透明的血红蛋白溶液层。

（1）血红蛋白提取和分离的程序可分为四大步，包括：样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定。

（2）血红蛋白由4条肽链组成，包括2条α肽链和2条β肽链，血红蛋白因含有血红素而呈红色，这有利于对提取过程的观察。

（3）洗涤红细胞的目的是去除杂蛋白，以利于血红蛋白的分离和纯化。将样品稀释后转移至离心管中，离心后选取下层暗红色的红细胞液体并将其转入烧杯中，加入5倍体积的生理盐水进行洗涤。

（4）由分析可知，血红蛋白分布在图2的③层。

（5）将滤液装入透析袋中，可除去分子量较小的杂质。