Question

试回答下列“蛋白质提取与分离实验”的有关问题：

（1）为了提取和分离血红蛋白，首先对红细胞进行洗涤以去除杂质蛋白，洗涤时应使用生理盐水而不使用蒸馏水的原因是_____。

（2）若要去除血红蛋白中的小分子杂质，采用图1装置。透析液是_____，一段时间后，若向烧杯中加入双缩脲试剂，透析袋内溶液是否出现紫色并说明判断的依据：_____。

（3）图4是用于分离蛋白质的凝胶色谱柱，装填凝胶色谱柱时，色谱柱内不能有气泡的存在，原因是_____。a、b均为蛋白质分子，其中先从凝胶色谱柱中洗脱出来的是a，是因为a蛋白质分子_____。

（4）图2、图3分别表示电泳法分离蛋白质和纸层析法分离叶绿体中色素的结果。不同蛋白质得以分离是因为_____；不同色素得以分离是因为_____。

Answer

防止红细胞吸水涨破 磷酸缓冲溶液 出现紫色，双缩脲试剂可以透过半透膜，与袋内血清蛋白反应，生成紫色物质 气泡会搅乱洗脱液中的蛋白质的洗脱次序，降低分离效果 相对分子质量大，无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快 不同蛋白质所带的电荷性质、分子大小和形状等不同，导致电泳时迁移速度不同 不同色素在层析液中的溶解度不同，导致层析时扩散速度不同

【解析】

血红蛋白的提取和分离流程为：红细胞的洗涤→血红蛋白的释放→分离血红蛋白溶液→透析→凝胶色谱柱的制作→凝胶色谱柱的装填→样品的加入和洗脱。

分离绿叶中色素原理：各色素随层析液在滤纸上扩散速度不同，从而分离色素。溶解度大，扩散速度快；溶解度小，扩散速度慢。滤纸条从上到下依次是：胡萝卜素（最窄）、叶黄素、叶绿素a（最宽）、叶绿素b（第2宽），色素带的宽窄与色素含量相关。

（1）洗涤红细胞时应使用生理盐水而不使用蒸馏水的原因是防止红细胞吸水涨破。

（2）要去除血红蛋白中的小分子杂质，采用图1装置进行透析。透析液是磷酸缓冲溶液，一段时间后，若向烧杯中加入双缩脲试剂，透析袋内溶液出现紫色，判断的依据：双缩脲试剂可以透过半透膜，与袋内血清蛋白反应，生成紫色物质。

（3）装填凝胶色谱柱时，色谱柱内不能有气泡的存在，原因是气泡会搅乱洗脱液中的蛋白质的洗脱次序，降低分离效果；由图4可知，a、b均为蛋白质分子，其中先从凝胶色谱柱中洗脱出来的是a，是因为a蛋白质分子相对分子质量大，无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快。

（4）图2、图3分别表示电泳法分离蛋白质和纸层析法分离叶绿体中色素的结果。不同蛋白质得以分离是因为不同蛋白质所带的电荷性质、分子大小和形状等不同，导致电泳时迁移速度不同；不同色素得以分离是因为不同色素在层析液中的溶解度不同，导致层析时扩散速度不同。