Question

某研究性学习小组了解到泡菜中的乳酸菌除了在发酵中产生乳酸，还可以降解亚硝酸盐，该小组利用泡菜液进行了相关的研究。请回答下列问题：

（1）乳酸菌和酵母菌在结构上的主要区别是乳酸菌____________________________。

（2）测定泡菜中亚硝酸盐的含量可以用_________法。食物中的亚硝酸盐绝大部分随人体尿液排出，其余的在特定条件下可以转变为致癌物______________。

（3）小组成员用改良的MRS固体培养基分离乳酸菌，该培养基成分如下：

蛋白胨	牛肉膏	酵母膏	葡萄糖	CaCO3	琼脂	蒸馏水	其他成分略
10g	10g	10g	20g	20g	20g	1000ml

①该培养基因含碳酸钙而不透明，乳酸菌产生的乳酸能溶解培养基中的碳酸钙，从而在菌落周围形成溶钙圈，该培养基属于______（填选择或鉴别）培养基。

②小组成员在分离纯化乳酸菌时，用______将泡菜液进行梯度稀释后，取0．1ml加入到50℃左右的培养基中摇匀，待凝固后，再在其上加盖一层透明的固体培养基。 加盖一层透明的固体培养基的目的是_____________________________________________。

③在恒温培养箱中培养72h后，挑取溶钙圈较大的菌落，用平板划线法进行进一步纯化。若图甲是接种培养后的菌落分布图，对应的平板划线操作示意图为___________。

④乳酸菌在-20℃的冷冻箱中长期保存时，需要加入一定量的___________。

Answer

无以核膜为界限的细胞核 比色 亚硝胺 鉴别 无菌水 隔绝空气（氧气），确保无氧环境 丙 甘油

【解析】

（1）运用平板划线法接种微生物时，在进行第二次以及其后的划线操作时'要从上一次划线的末端开始划线。每次划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落；

（2）培养基的分类：

种类

制备方法

特征

用途

选择培养基

培养基中加入某种化学成分

根据某种微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基使混合菌样中的劣势菌变成优势菌，从而提高该菌的筛选率

加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌

鉴别培养基

加入某种试剂或化学药品

依据微生物产生的某种代谢产物与培养基中特定试剂或化学药品反应，产生明显的特征变化而设计

鉴别和区分菌落相似的微生物伊红和美蓝培养基可以鉴别大肠杆菌

（1）乳酸菌属于原核生物，酵母菌属于真核生物，原核细胞和真核细胞在结构上的主要区别是原核细胞无以核膜为界限细胞核；
（2）测定泡菜中亚硝酸盐的含量时，要将显色后的样品与已知浓度的标准显色液进行比色，该方法叫比色法；食物中的亚硝酸盐绝大部分随人体尿液排出，其余的在特定条件下可以转亚硝胺，亚硝胺是致癌物；

（3）①鉴别培养基是依据微生物产生的某种代谢产物与培养基中特定试剂或化学药品反应，产生明显的特征变化而设计的，故题干中的培养基类型属于鉴别培养基；

②为避免杂菌混入，进行梯度稀释应用无菌水操作；因乳酸菌为厌氧生物，故加盖一层固体培养基的目的是隔绝空气（氧气），确保无氧环境；

③使用平板划线法时，在进行第二次以及其后的划线操作时要从上一次划线的末端开始划线，画3-5道直线，且最后一个区域不能与第一区域相连，如图丙所示；

④长期保存菌种应该用甘油管藏法，因此乳酸菌在-20℃的冷冻箱中长期保存时，需要加入一定量的甘油。