Question

纤维素的微生物分解对减轻废弃物污染和作物秸秆再利用具有重要应用价值。某兴趣小组从富含纤维素的土壤中取样，加入选择培养基中进行振荡培养，待培养液混浊后接种于鉴别培养基上进行培养，筛选出能够分解纤维素的微生物。请回答：

（1）上述选择培养的目的是_________。培养过程中“振荡”作用是_________。

（2）鉴别培养时，为了得到单菌落，常采用平板划线法或_________进行接种，后一种方法测得的菌落数比活菌实际数目低的原因是_________。

（3）鉴别培养基中需加入_________才能对纤维素分解菌加以筛选。鉴别培养后，培养基中出现了几个以菌落为中心的透明圈，根据_________（ 填 “菌落直径”、“透明圈直径”或“透明圈直径/菌落直径”）的大小可初步筛选出高效纤维素分解菌。

（4）从纯化培养得到的纤维素分解菌中分离提取纤维素酶后怎样确定该酶酶活性的高低？_________。

Answer

促进纤维分解菌生长，抑制其他微生物生长（或增加纤维分解菌的浓度） 促进微生物对营养物质和氧气的充分接触和利用 稀释涂布平板法 两个或多个细菌聚在一起只能形成一个菌落 刚果红 透明圈直径/菌落直径 将分离提取的纤维素酶与纤维素混合，通过测定单位时间、单位体积中葡萄糖的生成量确定该酶酶活性的高低

【解析】

从土壤中分离纤维素分解菌的一般步骤是：土壤取样、选择培养、梯度稀释、涂布培养和筛选菌株；筛选纤维素分解菌需要用以纤维素为唯一碳源的选择培养基，纤维素分解菌可以用刚果红染液进行鉴别，在培养基中加入刚果红染液，在其菌落周围会出现透明圈。

（1）选择培养的目的是增加目的菌（纤维素分解菌）的浓度，同时也可抑制其他微生物的生长；为促进微生物对营养物质和氧气的充分接触和利用， 培养过程中需“振荡”。

（2）常用的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法；其中稀释涂布平板法的具体操作是先将菌液进行一系列的梯度稀释，然后取少量菌液涂布在培养基表面，合适的稀释度下可以获得单个菌体形成的菌落，但当两个或多个细胞连在一起时，平板上只能形成一个菌落，故这种方法统计到的菌落数比活菌的实际数目要低。

（3）鉴别培养基是在培养基中加入某种试剂或化学药品，通过微生物产生的某种代谢产物与其反应产生明显的特征变化而加以筛选，对纤维素分解菌加以筛选时通常需要加入刚果红；使用刚果红染色法时，纤维素酶作用的透明圈的直径与菌落直径比越大，酶活性越强，故根据透明圈直径/菌落直径的大小可初步筛选出高效纤维素分解菌。

（4）纤维素酶活性的测定方法一般是对纤维素酶分解滤纸等纤维素后所产生的葡萄糖进行定量测定，这种定量测定能对单位时间、单位体积重葡萄糖的增加量进行测定，从而反映出纤维素酶的活性。