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基因工程目前已成为生物科学的核心技术,在农牧业、工业、医药卫生等方面有良好的应用前景。回答下列问题:

1)基因表达载体中的复制原点,本质上是一段富含AT碱基对的DNA序列,它易与引物结合而成为复制起点的原理是____________。启动子与复制原点的化学本质____________(填“相同”或“不同”),启动子功能的含义主要是________________________

2)利用PCR技术扩增目的基因,可在PCR扩增仪中进行的三步反应是____________。若在PCR扩增仪中加入模板DNA分子100个,则经过30次循环后,DNA分子数量将达到____________个。

3)植物基因工程技术主要用于提高农作物的抗逆能力,如抗虫性、抗病性等。我国的抗虫棉就是通过____________法导人抗虫基因____________基因培育成功的;抗病毒的转基因小麦是导入抗病毒基因培育的,使用最多的抗病毒基因有________________________

 

A-T碱基对多,相对氢键少,DNA易解旋 相同 启动子驱动基因转录成mRNA 高温变性,低温退火、中温延伸 100×230 花粉管通道 Bt毒蛋白 病毒外壳蛋白基因和病毒的复制酶基因 【解析】 基因工程技术的基本步骤: (1)目的基因的获取:方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。 (2)基因表达载体的构建:是基因工程的核心步骤,基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。 (3)将目的基因导入受体细胞:根据受体细胞不同,导入的方法也不一样.将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法;将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法;将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。 (4)目的基因的检测与鉴定:分子水平上的检测:①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术;②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术;③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定:抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。 PCR一般要经历三十多次循环,每次循环可分为变性、复性、延伸三步。在循环之前,常需要进行一次预变性,以便增加大分子模板DNA彻底变性的概率。 PCR过程为: 变性,当温度上升到90 ℃以上时,氢键断裂,双链DNA解旋为单链。 复性,当温度降低到50℃左右时,两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合。 延伸,温度上升到72 ℃左右,溶液中的四种脱氧核苷酸在DNA聚合酶的作用下,根据碱基互补配对原则合成新的DNA链。 (1)基因表达载体包括启动子、终止子、目的基因、标记基因和复制原点等,所以复制原点和启动子化学本质相同,都是一段特定的DNA序列。已知复制原点中含A-T碱基对多,因此含氢键少,结构不稳定,易解旋,可做为复制的起点,而启动子是驱动基因转录成mRNA的。 (2)PCR技术扩增目的基因包括三步反应:高温变性(氢键断裂)、低温退火(复性)形成氢键和中温延伸形成子链。PCR扩增仪可以自动调控温度,实现三步反应循环完成。PCR技术扩增目的基因的原理是DNA双链复制,结果使DNA呈指数增长,即2n(n为扩增循环的次数),所以100个DNA分子,30次循环,使DNA数量可达到100×230个。 (3)植物基因工程培育抗虫抗病等转基因植物用到的抗虫基因有Bt毒蛋白基因、蛋白酶抑制剂基因等,我国的抗虫棉就是利用花粉管通道法导入Bt毒蛋白基因培育的;抗病毒基因有病毒外壳蛋白基因和病毒的复制酶基因。
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考点分析:
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患者男,48岁,发热伴寒战,入院进行血液B超及CT检查,疑似肝脓肿。其中细菌性肝脓肿的主要病原菌是:大肠埃希菌、克雷伯菌、链球菌、金黄色葡菊球菌、厌氧菌等。近年来,克雷伯杆菌感染导致的细菌性肝脓肿患者比例有增高的趋势,为确定致病原因需要进行细菌的培养及药敏实验检查病原体种类。请回答下列问题:

1)细菌培养一般在30~37℃,pH调至____________,进行无菌操作。对接种环等金属用具,直接在洒精灯火焰的____________灼烧,可以迅速彻底地灭菌。

2)微生物接种的方法很多,最常用的方法有____________法。虽然这些技术的操作方法各不相同,但是,其核心都是防止杂菌的污染,保证____________________________________

3)区分细菌种类可以通过多种途径,如生化试验IMVC试验可用于肠道杆菌鉴定,其中大肠埃希菌、克雷伯菌鉴定结果分别是++--.--++ ;还可以通过菌落特征,如菌落的____________等的不同来区别。常用来统计样品中活菌数目的方法是_____________,测定细菌数量的方法还有____________法,无论哪种方法得到的细菌数量都是____________值。

 

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小麦是我国重要的粮食作物,种植面积极为广泛。现有不抗锈病的小麦(基因型ee基因位于7号染色体上)与抗锈病的纯合四体小麦(7号染色体有4条,其上共有4个相关抗锈病基因)进行有性杂交,完成下列问题:

1)四体小麦的形成是____________变异的结果。欲确定抗锈病的小麦是四体,最简捷的方法是:选取小麦的____________(填“分生区”或“伸长区”)材料制成装片,进行____________找到____________期细胞,观察__________________

2)杂交产生的三体小麦(7号染色体有3条),在减数分裂同源染色体联会时,任意两条染色体正常配对,在减数第一次分裂后期正常分离,而另一条随机移向细胞任意一极。若上述杂交子代与不抗锈病小麦杂交,后代基因型及比例是____________,表现型及比例是____________,并画出相应遗传图解。___________

 

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植物虽然没有神经系统,但植物体也能对自身的生命活动进行调节。在植物的生长发育过程中,几乎所有生命活动都受到植物激素的调节,发现最早的是生长素。发现生长素的过程,是从达尔文注意到植物向光性并对此进行研究开始的。请据达尔文实验回答相关问题:

1)上图是达尔文利用金丝雀虉草的胚芽鞘进行的实验及结果,依此提出的假说是胚芽鞘尖端受单侧光照射产生____________并向下面的____________传递。造成____________而使胚芽鞘出现向光性弯曲。

2)胚芽鞘的作用有_________________________

3)请利用燕麦胚芽鞘、一定浓度的生长素和琼脂块等相关材料用具,设计实验,证明生长素能促进生长(写出实验设计思路和预期结果)________________________________________________

 

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C肽又称连接肽,由胰岛B细胞分泌,它与胰岛素有一个共同的前体——胰岛素原。1分子胰岛素原经蛋白酶的作用,分解为1分子胰岛素和1分子C肽,同时释放入血液中。如图所示1分子胰岛素原切去C肽形成胰岛素的过程(图中箭头表示切点,数字表示氨基酸序号,-S-S-表示二硫键),据图回答下列问题:

1)胰岛素是由____________个氨基酸组成的蛋白质,至少含有____________个游离羧基。蛋白酶可以水解蛋白质,而在胰岛素形成过程中蛋白酶的作用是________________________

2)在临床中,对于接受胰岛素治疗的患者,测定其血液中胰岛素水平,不能评价自身胰岛功能。可以通过测定C肽水平,来评价自身胰岛B细胞的功能,其原因是________________________

3)胰岛素功能主要是__________。临床上低血糖原因可以分为两种,一是胰岛素分泌过多,二是其他原因。如何通过测定C肽水平米判断低血糖原因,请加以说明:____________

 

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研究发现仙人掌和萝卜相比,有一个很特殊的CO2固定过程:夜间气孔开放,吸收的CO2生成苹果酸储存在液泡中(如图一所示);白天气孔关闭,液泡中的苹果酸经脱羧作用释放CO2用于光合作用(如图二所示)。而萝卜固定CO2过程如图三所示。据图回答下列问题:

1)据图可知仙人掌和萝卜共有的代谢途径是____________________________

2)仙人掌夜晚能吸收CO2,却不能合成(CH2O)的原因是缺乏暗反应必需的____________,白天进行光合作用所需的CO2的来源有____________________________________

3)在上午1100点时,突然降低环境中CO2浓度后的一小段时间内,仙人掌和萝卜的叶肉细胞中C3含量的变化趋势分别是_______(填“升高”、“降低”或“基本不变”),原因是________________________

 

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