Question

某生物兴趣小组用无菌水将葡萄皮上的微生物冲洗到无菌的锥形瓶中，然后按甲所示过程进行醋酸菌的纯化培养。

回答下列问题：

（1）在菌种培养过程中，需将平板倒置，其主要目的是_________________________。在操作B后，可根据菌落特征对醋酸菌进行筛选，原理是________________________。

（2）图甲中液体培养的目的是_________________________。

（3）图甲中C过程采用的微生物计数方法是_________________________。经培养后菌落在平板上的分布如图乙所示，推测接种时的操作失误是_________________________。

（4）若测得稀释倍数为10⁶的培养基中的平板上，菌落数的平均值为254，则每毫升样品中的菌株数是（涂布平板时所用稀释液的体积为0．1mL）_____________。用该方法统计的醋酸菌数目会比活菌的实际值________（填“小”或“大”），原因是_________________________________。

Answer

防止培养皿盖上的水珠落入培养基，避免培养基中的水分过快地挥发 一定的培养条件下，同种微生物表现出稳定的菌落特征 增加醋酸菌的浓度 活菌计数法（稀释涂布平板法） 涂布不均匀 2．54×109 小 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落

【解析】

1、微生物常见的接种的方法

①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。

②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。

2、平板划线的操作的基本步骤是：

（一）、右手持接种环，经火焰灭菌，待凉后，在火焰旁打开盛有菌液的试管棉塞，并将试管口过火焰，将以冷却的接种环伸入菌液，沾取一环菌液，将试管口过火焰丙塞上棉塞。

（二）、左手斜持琼脂平板，皿盖打开一条缝，右手于火焰近处将接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖，接种环不应划破培养基表面。

（三）、烧灼接种环，杀灭环上残留菌液，待冷却（是否冷却，可先在培养基边缘处试触，若琼脂溶化，表示未凉，稍等再试），从第一区域划线的末端开始往第二区内划线，重复以上操作，在第三四五区内划线，注意不要将最后一区的划线与第一区相连。

（四）、将平板倒置，放入培养箱中培养。

3、果酒和果醋制作过程中的相关实验操作：

（1）材料的选择与处理：选择新鲜的葡萄，榨汁前先将葡萄进行冲洗，除去枝梗。

（2）灭菌：①榨汁机要清洗干净，并晾干。②发酵装置要清洗干净，并用70%的酒精消毒。

（3）榨汁：将冲洗除枝梗的葡萄放入榨汁机榨取葡萄汁。

（4）发酵：①将葡萄汁装人发酵瓶，要留要大约的空间，并封闭充气口。②制葡萄酒的过程中，将温度严格控制在18℃~25℃，时间控制在10~12d左右，可通过出料口对发酵的情况进行。及时的监测。

③制葡萄醋的过程中，将温度严格控制在30℃~35℃，时间控制在前7~8d左右，并注意适时通过充气口充气。

（1）在菌种培养过程中，为了防止培养皿上凝结的水珠落入培养基上造成污染，避免培养基中的水分过快地挥发，一般是等待平板冷却凝固后将平板倒置进行培养。一定的培养条件下，同种微生物表现出稳定的菌落特征，故可根据菌落特征对醋酸菌进行筛选。

（2）图甲中液体进行扩大培养的目的是增加醋酸菌的浓度。

（3）图甲中C过程采用的微生物计数方法是活菌计数法（稀释涂布平板法）。经培养后菌落在平板上的分布不均匀，推测是接种时涂布不均匀造成的。

（4）若测得稀释倍数为106的培养基中的平板上，菌落数的平均值为254，则每毫升样品中的菌株数是254×106/0.1=2.54×109。当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，故用该方法统计的醋酸菌数目会比活菌的实际值小。