Question

沉香精油是由沉香木经过水蒸气蒸馏法或萃取法提炼而成的，是沉香的精华所在。请回答下列问题：

（1）用水蒸气蒸馏法提取沉香精油比萃取法的出油率____________，原因可能是__________________。影响沉香精油萃取效率和质量的因素有很多，为了保证沉香精油的质量，可以采取的做法是__________________________。

（2）树种、受伤、细菌等微生物都是沉香树结香的条件。有人想把影响结香的细菌分离出来并鉴定，对配制的培养基采用高压蒸汽灭菌，目的是_________________。纯化菌株时划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌落，第二划线区域的第一条线上无菌落，其它划线上有菌落。分析造成第二划线区域的第一条线无菌落的可能原因是________________________(答一点即可)。

（3）进行梯度稀释时的一般操作是将1mL菌液移入盛有9mL的无菌水中，常用稀释涂布平板法进行细菌计数，其原理是________________；但统计的菌落数往往_______(填“多于”或“少于”)稀释液中的活菌数，原因是：_____________________________。

Answer

低 用水蒸气蒸馏法提取的沉香精油会失去部分挥发性小的成分（或萃取法会溶解出分子结构比较复杂的植物蜡、树脂和色素等挥发性小的成分） 事先精制有机溶剂，除去杂质 使培养基中所有微生物永远丧失生长繁殖能力（杀死培养基中所有微生物，包括芽孢和孢子） 接种环灼烧后未冷却划线（未从第一区域末端开始） 培养基表面的一个菌落来源于一个活菌 少于 有些活菌在培养过程中死亡（个别菌落可能是由2个或多个细菌形成）

【解析】

本题综合考查学生对植物芳香油的提取、培养基的灭菌、微生物的纯化与分离以及稀释涂布平板法等相关知识的识记和理解能力。熟记并理解相关的方法、原理、注意事项等基础知识、形成清晰的知识网络，在此基础上结合题意作答。

（1）用水蒸气蒸馏法提取沉香精油会失去部分挥发性小的成分，萃取可以弥补该缺陷，所以水蒸气蒸馏法提取比萃取法的出油率低。影响沉香精油萃取效率和质量的因素有很多，如萃取温度和时间等，为了保证沉香精油的质量，可以采取的做法是事先精制有机溶剂，除去杂质。

（2）培养基采用高压蒸汽灭菌是使用强烈的理化因素进行灭菌，目的是杀死培养基中所有微生物，包括芽孢和孢子。纯化菌株时，通常使用的划线工具是接种环，采用灼烧方法对其进行灭菌，划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌落，第二划线区域所划的第一条线上无菌落，其他划线上有菌落，造成划线无菌落可能的原因是接种环灼烧后未冷却，或划线未从第一区域末端开始划线。

（3）稀释涂布平板法常用来进行微生物的计数，其原理是培养基表面的一个菌落来源于稀释液中的一个活菌，由于菌落可能是由两个或多个细胞形成，以及有些活菌在培养过程中死亡，所以统计的菌落数往往少于稀释液中的活菌数。