Question

某同学在做微生物实验时，不小心把圆褐固氮菌和酵母菌混在一起。该同学设计下面的实验，分离得到纯度较高的圆褐固氮菌和酵母菌。

（1）实验原理：圆褐固氮菌是自生固氮菌，能在无氮培养条件下生长繁殖而酵母菌则不能；青霉素不影响酵母菌等真菌的生长繁殖，而会抑制圆褐固氮菌的生长繁殖。

（2）材料用具：（略）

（3）实验步骤

①制备两种培养基，将两种培养基各自分成两份，依次标号A、a和B、b。

②____________________________________，并在25℃条件下培养_____天。

③分别从A、B培养基的菌落中挑取生长良好的菌并分别接种到a、b培养基中，适宜条件下培养3～4天。

（4）请问答

①对新配制的培养基灭菌时所用的设备是_________________。

②本实验中，配制的分离用的培养基成分特点：A、a是_____培养基，B、b是_______培养基，根据上述原理配制的培养基属于_____培养基。

③根据所需目的配制上述培养基时除营养要协调外还应注意_________。

④实验步骤中第③步的目的是___________。

⑤圆褐固氮菌与酵母菌在结构上的主要差异为______________。

⑥青霉素抑制圆褐固氮菌等细菌的生长繁殖，其作用机理是破坏或抑制其细胞壁的形成。请据此推测不影响酵母菌等真菌生长繁殖的原因是______________。

Answer

分别在A、B培养基上接种等量的混合的微生物 3～4 高压蒸汽灭菌锅 无氮 含青霉素的 选择 pH要适宜 分离得到纯度较高的圆褐固氮菌和酵母菌 圆褐固氮菌无成形的细胞核 细菌细胞壁和真菌细胞壁的化学组成不同

【解析】

微生物分离的基本步骤为配制培养基、接种、培养筛选等。培养基，是指供给微生物、植物或动物（或组织）生长繁殖的，由不同营养物质组合配制而成的营养基质。一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐（包括微量元素）、维生素和水等几大类物质。培养基既是提供细胞营养和促使细胞增殖的基础物质，也是细胞生长和繁殖的生存环境。培养基种类很多，根据培养功能可分为基础培养基、选择培养基、加富培养基、鉴别培养基等；根据使用范围可分为细菌培养基、放线菌培养基、酵母菌培养基、真菌培养基等。培养基配成后一般需测试并调节pH，还需进行灭菌，通常有高温灭菌和过滤灭菌。培养基由于富含营养物质，易被污染或变质。选择培养基是指一类根据特定微生物的特殊营养要求或其对某理化因素抗性的原理而设计的培养基。具有只允许特定的微生物生长，而同时抑制或阻止其他微生物生长的功能。

（3）②培养基配制好以后需要将菌种接种在上面培养。一般培养3～4天可以看到菌落。

（4）①用高压蒸汽灭菌锅对新配制的培养基进行高压蒸汽灭菌。

②圆褐固氮菌能在无氮培养条件下生长繁殖而酵母菌则不能；青霉素不影响酵母菌等真菌的生长繁殖，而会抑制圆褐固氮菌的生长繁殖。故一个培养基中不含氮（圆褐固氮菌生长），一个培养基中含青霉素（酵母菌生长）。这两类培养基都属于选择培养基。

③培养基的pH要适宜。

④实验步骤中第③步转到新的培养基上培养，目的是分离得到纯度较高的圆褐固氮菌和酵母菌。

⑤圆褐固氮菌（细菌）与酵母菌（真菌）在结构上的主要差异为圆褐固氮菌无成形的细胞核。

⑥细菌细胞壁的成分主要是肽聚糖，真菌细胞壁的成分主要是壳多糖。