Question

据报道，科研人员已将POLLED基因的一个等位基因插入到奶牛胚胎成纤维细胞的基因组中。他们随后进行体细胞核移植：将这种经过基因改造的胚胎成纤维细胞移植到移除细胞核的奶牛卵母细胞中，使其重组并能发育为新的胚胎，并将形成的重组胚胎移植到代孕母奶牛子宫中，最终产下5只小牛，其中的两只小牛Spotigy和Buri仍然是活的，如今有10个月大。更重要的是，他们没有发现这些小牛存在角芽的证据。

（1）科研人员将POLLED基因的一个等位基因插入到奶牛胚胎成纤维细胞的基因组中的常用方法是___________________________。

（2）为了使POLLED基因的一个等位基因能够表达和发挥作用，就要进行__________的构建。在构建过程中，要用到的两种酶是_______________、__________________。

（3）从屠宰场收集奶牛卵巢，采集卵母细胞，在体外培养到___________________期。

（4）奶牛一般选取发育到______________阶段的重组胚胎进行移植。移植的胚胎能在代孕奶牛子宫内发育的免疫学基础是___________________________________________。

（5）中国荷斯坦牛为我国奶牛的主要品种，它的育种原理是_________________。它与该转基因奶牛的培育原理________（填“相同”或“不同”）。

Answer

显微注射技术 基因表达载体 限制酶 DNA连接酶 减数第二次分裂中 桑椹胚或囊胚 受体子宫对移入子宫的外来胚胎基本上不发生免疫排斥反应 基因重组 相同

【解析】

1、基因工程技术的基本步骤：

（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。

（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。

（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样.将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。

（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因——DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA——分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质——抗原——抗体杂交技术.个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。。

2、动物胚胎发育的基本过程：（1）受精场所是母体的输卵管。（2）卵裂期：细胞有丝分裂，细胞数量不断增加，但胚胎的总体体积并不增加，或略有减小。（3）桑椹胚：胚胎细胞数目达到32个左右时，胚胎形成致密的细胞团，形似桑椹。是全能细胞。（4）囊胚：细胞开始出现分化（该时期细胞的全能性仍比较高）。聚集在胚胎一端个体较大的细胞称为内细胞团，将来发育成胎儿的各种组织。中间的空腔称为囊胚腔。（5）原肠胚：有了三胚层的分化，具有囊胚腔和原肠腔。

（1）迄今为止，显微注射技术是转基因动物中采用最多，也是最为有效的一种将目的基因导入动物细胞的方法。

（2）基因表述载体的构建是使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时，使目的基因能够表达和发挥作用。在构建过程中，要用到的两种酶是限制酶（限制性核酸内切酶）与DNA连接酶。

（3）从屠宰场收集奶牛卵巢，采集卵母细胞，在体外培养到减数第二次分裂中期。

（4）不同动物胚胎移植的时间不同，例如，牛、羊一般要培养到桑椹胚或囊胚阶段才进行移植。大量的研究已经证明，受体子宫对移入子宫的外来胚胎基本上不发生免疫排斥反应，这为胚胎在受体子宫内的存活提供了可能。

（5）我国奶牛的主要品种中国荷斯坦牛（原称中国黑白花牛），是将国外的荷斯坦——弗里生牛引进后，在我国经过长期驯化，与当地黄牛进行杂交和选育，逐渐形成的优良品种。转基因奶牛的培育原理也是基因重组。