Question

希尔反应是测定叶绿体活力的常用方法。希尔反应基本原理：光照下，叶绿体释放O₂，同时氧化型DCIP（2，6一二氯酚靛酚）被还原，颜色由蓝色变成无色。DCIP颜色变化引起的吸光率变化可反映叶绿体活力。研究小组利用菠菜叶进行了叶绿体活力的测定实验。回答下列问题：

（1）制备叶绿体悬液：选取10g新鲜的菠菜叶加入研钵，研磨前加入适量的0．35mol/LNaCI溶液和pH7．8的酸碱缓冲液等；研磨成匀浆后，用纱布过滤，取滤液进行_____，分离得到叶绿体；将叶绿体置于______溶液中，以保证叶绿体的正常形态，获得叶绿体悬液。

（2）测定叶绿体活力：分组如下，并按下表加入试剂；测定各组吸光率。

试管号	磷酸缓 冲液(mL)	叶绿体 悬液(mL)	煮沸(min)	DCIP(mL)
1	9.4	0.1	－	0.5
2	9.4	0.1	5	0.5
3	9.9	0.1	－	－

注：“一”表示不处理或不加入。

①希尔反应模拟了光合作用中_____阶段的部分变化，该阶段在叶绿体的_____中进行。氧化型DCIP在希尔反应中的作用，相当于_____在该阶段中的作用。

②煮沸处理后，需向2号试管中加入一定量的_____，以保证各试管中液体的量相等。

③3号试管的作用是_____。

Answer

离心 0．35mol/LNaCl（或等渗） 光反应 类囊体膜 NADP+ 蒸馏水 测定该浓度叶绿体悬液自身的吸光率作为对照

【解析】

光合作用由光反应和反应两阶段构成，希尔反应活力测定的基本原理是将叶绿体加入DCIP（二氯酚靛酚）溶液并照光，水在光照下被分解，产生氧气等，因此模拟的是光反应阶段；氧化剂DCIP既可利用于颜色反应，还可作为氢载体，使水分解产生氧气；而溶液中的DCIP被还原并发生颜色变化，这些变化可用仪器进行测定。

(1)制备叶绿体悬液时，先选取10 g新鲜的菠菜叶加入研钵，研磨前加入适量的0.35 mol/L NaCl溶液（维持叶绿体形态）和pH 7.8的酸碱缓冲液（维持一定的pH）等；研磨成匀浆后，用纱布过滤，取滤液进行离心，分离得到叶绿体；将叶绿体置于0.35 mol/L NaCl（或等渗）溶液中，以保证叶绿体的正常形态，获得叶绿体悬液。

(2)①希尔反应模拟了光合作用中光反应阶段的部分变化，该阶段在叶绿体的类囊体膜中进行。氧化型DCIP（2，6―二氯酚靛酚）可被还原，因此氧化型DCIP在希尔反应中的作用，相当于NADP＋在该光阶段中的作用。

②1和2号试管对照的不同是温度处理后叶绿体的活性，其余均为无关变量。煮沸处理后，因蒸发部分水分，因此需向2号试管中补充一定量的蒸馏水，以保证各试管中液体的量相等。

③1和3号试管对照的不同是是否添加DCIP，3号试管没有添加DCIP，作用是作为对照，测定该浓度叶绿体悬液自身的吸光率。