Question

某研究小组进行药物试验时，以动物肝细胞为材料，测定药物对体外培养细胞的毒性。供培养的细胞有甲、乙两种，甲细胞为肝肿瘤细胞，乙细胞为正常肝细胞。请回答下列有关动物细胞培养的问题。

（1）将数量相等的甲细胞和乙细胞分别置于培养瓶中培养，培养液及其他培养条件均相同。一段时间后，观察到甲细胞数量比乙细胞数量__________。

（2）在动物细胞培养时，通常在合成培养基中加入适量血清，其原因是__________。

（3）在两种细胞生长过程中，当乙细胞铺满瓶壁时，其生长__________。药物试验需要大量细胞，两种细胞频繁传代，甲细胞比乙细胞可以传代的次数更__________。若用动物的肝脏组织块制备肝细胞悬液，需用__________处理。

（4）为了防止培养过程中细菌的污染，可向培养液中加入适量的__________。

（5）已知癌基因X过量表达与肝肿瘤的发生密切相关，要试验一种抗肿瘤药物Y对甲细胞生长的影响，可将甲细胞分为A、B两组，A组细胞培养液中加入__________，B组细胞培养液中加入等量无菌生理盐水，经培养后，从A、B两组收集等量细胞，通过分别检测X基因在A、B两组细胞中的__________或__________合成水平的差异，确定Y的药效。

Answer

多 血清可以补充合成培养基中缺乏的物质 停止 多 胰蛋白酶 抗生素 无菌生理盐水配制的Y溶液 mRNA 蛋白质

【解析】

1、动物细胞培养的过程：取动物组织块→剪碎组织→用胰蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养液中（原代培养）→放入二氧化碳培养箱培养→贴满瓶壁的细胞用酶分散为单个细胞，制成细胞悬液→转入培养液（传代培养）→放入二氧化碳培养箱培养。

2、动物细胞培养的条件：

（1）无菌、无毒的环境：①消毒、灭菌；②添加一定量的抗生素；③定期更换培养液，以清除代谢废物；

（2）营养物质：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等，还需加入血清、血浆等天然物质；

（3）温度和pH；

（4）气体环境：95%空气（细胞代谢必需的）和5%的CO2（维持培养液的pH）。

（1）肝肿瘤细胞（甲）比正常肝细胞（乙）的分裂能力强，细胞周期短，因此在其他条件相同时，相同时间内肝肿瘤细胞（甲）产生的子代细胞多。

（2）血清可以补充合成培养基中缺乏的物质（如促细胞生长因子等），因此在动物细胞培养时，通常要在合成培养基中加入适量血清。

（3）乙细胞为正常肝细胞，存在接触抑制，因此在这两种细胞生长过程中，当乙细胞铺满瓶壁时，其生长停止；

甲细胞是肝肿瘤细胞，能无限增殖，因此其传代的次数比乙多；

胰蛋白酶能消化组织细胞间的蛋白质，使组织细胞分散成单个细胞。

（4）培养瓶中加入抗生素可以抑制细菌的污染。

（5）根据题干“试验一种抗肿瘤药物Y对甲细胞生长的影响”，自变量是抗肿瘤药物Y，因变量是细胞的生长（可以用基因的表达情况作为指标），所以设计实验如下：

将甲细胞分为A、B两组，A组细胞培养液中加入无菌生理盐水配制的Y溶液Y，B组细胞培养液中加入无菌生理盐水，经培养后，从A、B两组收集等量细胞，通过分别检测X基因在A、B两组细胞中的mRNA或蛋白质合成水平的差异，确定Y的药效。