Question

神经纤毛蛋白-1（NRP-1）是血管内皮生长因子的新型受体，经实验证明，与正常组织细胞相比，NRP-1在乳腺癌（MCF7）细胞中高表达，通过参与多种信号转导来促进肿瘤血管的生成，进而促进肿瘤体积的增长。本研究将为 NRP-1 单克隆抗体靶向治疗乳腺癌提供数据基础。

（1）取乳腺癌（MCF7）组织块，运用____________________技术获得 MCF7 细胞用于后续实验。用人的_____________________蛋白对小鼠进行注射，使小鼠产生免疫反应，制备杂交瘤细胞，将杂交瘤细胞转到多孔培养板上培养，吸取培养孔中的________________（填上清液或沉淀细胞），应用_________________技术进行抗体阳性检测。经多次筛选和细胞培养，获得 NRP-1 单克隆抗体（NRP-1 MAb）。

（2）将 MCF7 细胞制成单细胞悬液，等量注入 4 组裸鼠（即无胸腺裸鼠）右前腋下，接种后 3 天开始给药NRP-1 单克隆抗体（NRP-1 MAb），共给药 7 次，对照组注射等量的生理盐水。每隔 5 天测算一次肿瘤的体积，如下图所示：

从上图中可以看出_________________________

（3）结合题干信息，综合以上研究请你推测 NRP-1 MAb 抑制肿瘤的作用机理是_____________________。

（4）注射不同剂量 NRP-1 MAb 33 天后，剥离肿瘤组织称重，实验结果如下图：

从该结果中可以看出___________________________。综合比较（3）和（5）的实验结果，可见中高剂量和低剂量的 NRP-1 MAb 在降低肿瘤体积和降低肿瘤重量上出现了不一致性。通过实验研究，有助于指导实践中科学用药。

Answer

动物细胞培养 神经纤毛蛋白-1（NRP-1） 上清液 抗原—抗体杂交 NRP-1 MAb能够有效地降低肿瘤的体积，中、高剂量抗体的降低效果比低剂量的效果更显著 NRP-1在MCF7细胞中高表达，NRP-1 MAb与NRP-1特异性结合，阻断了血管内皮生长因子与NRP-1的结合，抑制了肿瘤血管生成，进而降低了肿瘤的体积 NRP-1 MAb能够有效地降低肿瘤组织的重量，中、高剂量抗体的降低效果稍微没有低浓度的好，不同剂量降低效果的差异并不显著

【解析】

单克隆抗体的制备过程是：对小动物注射抗原，从该动物的脾脏中获取效应B细胞，将效应B细胞与骨髓瘤细胞融合，筛选出能产生单一抗体的杂交瘤细胞，克隆化培养杂交瘤细胞（体内培养和体外培养），最后获取单克隆抗体。

（1）取乳腺癌组织块，通过动物细胞培养技术获得MCF7细胞用于后续实验；用人的神经纤毛蛋白对小鼠进行注射使小鼠产生免疫反应；抗体较轻，会留在上清液中，故要吸取培养孔中的上清液；应用抗原-抗体杂交技术进行抗体阳性检测；

（2）根据题图分析可知，经过给药NRP-1 MAb处理的肿瘤体积均小于对照组，说明NRP-1 MAb能够有效地降低肿瘤组织的重量且中、高剂量抗体的降低效果比低剂量的效果更显著；

（3）已知NRP-1在乳腺癌（MCF7）细胞中高表达，通过参与多种信号转导来促进肿瘤血管的生成，进而促进肿瘤体积的增长，而NRP-1 单克隆抗体则可以和NRP-1特异性结合，故阻断了血管内皮生长因子与NRP-1的结合，抑制了肿瘤血管生成，进而降低了肿瘤的体积；

（4）分析题图可知，比较实验组与对照组的肿瘤组织重量NRP-1 MAb能够有效地降低肿瘤组织的重量，但中、高剂量抗体的降低效果稍微没有低浓度的好，不同剂量降低效果的差异并不显著。