Question

Rag₂基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞(ES细胞)对Rag₂基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如图：

（1）步骤①中，在核移植前应去除卵母细胞的________。

（2）步骤②中，重组胚胎培养到________期时，可从其内细胞团分离出ES细胞。

（3）步骤③中，需要构建含有Rag₂基因的表达载体。可以根据Rag₂基因的__________设计引物，利用PCR技术扩增Rag₂基因片段。用Hind?和Pst?限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag₂基因片段。为将该片段直接连接到表达载体，所选择的表达载体上应具有_____酶的酶切位点。

（4）为检测Rag₂基因的表达情况，可提取治疗后小鼠骨髓细胞的_____，用抗Rag₂蛋白的抗体进行杂交实验。

Answer

细胞核 囊胚 核苷酸序列 HindⅢ和PstⅠ 蛋白质

【解析】

1、动物核移植的概念：将动物的一个细胞的细胞核移入一个去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体。

2、胚胎干细胞简称ES或EK细胞，来源于早期胚胎或原始性腺（即囊胚期的内细胞团）。

3、在基因工程中，目的基因和质粒需要用同种限制酶进行切割，形成相同的黏性末端，再用DNA连接酶连接成重组质粒。

4、目的基因分子水平上的检测：

①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；

②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；

③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。

（1）核移植是将体细胞核移植到去核的卵母细胞中，所以实验前要去除卵母细胞的细胞核。

（2）内细胞团位于囊胚中，所以重组胚胎培养到囊胚期。

（3）设计引物要遵循碱基互补配对原则，所以根据Rag2基因的核苷酸序列进行设计。Rag2基因是利用限制酶HindⅢ和PstⅠ切割获得的，所以表达载体应具有HindⅢ和PstⅠ的酶切位点。

（4）基因表达的产物是蛋白质，所以提取小鼠骨髓细胞的蛋白质进行抗原-抗体杂交。