Question

凝胶色谱技术是六十年代初发展起来的一种快速而又简单的分离技术，由于设备简单、操作方便，不需要有机溶剂，对高分子物质有很好的分离效果，目前已被生物化学，分子免疫学等有关领域广泛应用。

（1）凝胶色谱法是根据_____________分离蛋白质的有效方法，也称作_____。

（2）样品处理中红细胞的洗涤要使用_____反复冲洗、离心，直到__________， 表明红细胞已洗涤干净。实验流程图中 A 操作要用到的试剂是_____。                                                     

（3）血红蛋白粗分离阶段，透析的目的是_____________。

（4）甲图中，实验流程 B 代表_____。进行乙图操作时，如果_________，说明色谱柱制作成功。其中，C 试剂是_________。

Answer

相对分子质量的大小 分配色谱法 生理盐水 上清液中没有黄色 蒸馏水和甲苯 除去小分子杂质 样品的加入和洗脱 红色区带均匀一致地移动 磷酸缓冲液

【解析】

1、血红蛋白的提取与分离的实验步骤主要有：（1）样品处理：①红细胞的洗涤，②血红蛋白的释放，③分离血红蛋白。（2）粗分离：①分离血红蛋白溶液，②透析。（3）纯化：调节缓冲液面→加入蛋白质样品→调节缓冲液面→洗脱→收集分装蛋白质。（4）纯度鉴定——SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。

2、凝胶色谱法（分配色谱法）原理：分子量大的分子通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程短，流动快；分子量小的分子穿过多孔凝胶颗粒内部，路程长，流动慢。

3、据图A表示血红蛋白的释放，B表示样品的加入和洗脱。

（1）凝胶色谱法是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法，也称作分配色谱法。

（2）样品处理中红细胞的洗涤要使用生理盐水反复冲洗、离心，直到离心后的上清液中没有黄色，表明红细胞已洗涤干净。实验流程图中A血红蛋白的释放操作要用到的试剂是蒸馏水和甲苯。

（3）血红蛋白粗分离阶段，透析的目的是除去小分子杂质。

（4）甲图中，实验流程B代表样品的加入和洗脱，进行乙图操作时，如果红色区带，说明色谱柱制作成功。其中，C试剂是20mmol/L的磷酸缓冲液。