Question

若要利用某目的基因（见图甲）和质粒载体（见图乙）构建重组 DNA（见图丙），限制性核酸内切酶的酶切位点分别是 BglⅡ（A^↓GATCT）、EcoRⅠ（G^↓AATTC）和 Sau3AⅠ（^↓GATC）。下列分析合理的是（    ）

A.用 EcoRⅠ切割目的基因和质粒载体

B.用 BglⅡ和 EcoRⅠ切割目的基因和质粒载体

C.用 BglⅡ和 Sau3AⅠ切割目的基因和质粒载体

D.用 EcoRⅠ和 Sau3AⅠ切割目的基因和质粒载体

Answer

D

【解析】

分析题图：用EcoRI切割目的基因和P1噬菌体载体，产生相同的黏性末端，用DNA连接酶连接时可能会发生反向连接；用BglI和EcoRI切割目的基因切割目的基因会产生两种DNA片段，一种含有目的基因，一种不含目的基因；用Bg1I和Sau3AI切割目的基因和P1噬菌体载体，也能产生相同的黏性未端，可能会发生反向连接；只有用EcoRI和Sau3AI切割目的基因和P1噬菌体载体，产生不同的黏性未端，防止发生方向连接，这样目的基因插入运载体后，RNA聚合酶的移动方向肯定与图丙相同。

A、用EcoRI切割目的基因和P1噬菌体载体，产生相同的黏性未端，用DNA连接酶连接时可能会发生反向连接，A错误；

B、用BglI和EcoRI切割目的基因切割目的基因会产生两种DNA片段，一种含有目的基因，一种不含目的基因，且有目的基因的片段与运载体结合时容易发生反向连接，B错误；

C、用BglI和Sau3AI切割目的基因和P1噬菌体载体，也能产生相同的黏性末端，可能会发生反向连接，C错误；

D、只有用EcoRI和Sau3AI切割目的基因和P1噬菌体载体，产生不同的黏性未端，防止发生反向连接，这样目的基因插入运载体后，RNA聚合酶的移动方向肯定与图丙相同，D正确。

故选D。