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为获得果胶酶高产菌株,科研人员进行了下列分离、筛选、鉴定工作。 (1)为分离果胶...

为获得果胶酶高产菌株,科研人员进行了下列分离、筛选、鉴定工作。

1)为分离果胶酶产生菌,科研人员配制了下表所示成分的培养基,该表空白处的两种成分是________。制备的培养基常用____________法进行灭菌。

K2HPO4
 

MgSO4
 

NaNO3
 

FeSO4
 

琼脂
 


 


 

01g
 

05g
 

3g
 

001g
 

2g
 

15g
 

加至1L
 

 

 

2)科研人员将采集的果园土壤放入无菌水中,震荡混匀,制成悬液。为获得较均匀分布的单菌落,还需要将悬液进行__________,________法接种于固体培养基上。接种后的培养基______状态放入培养箱。

3)选择单菌落数目适宜的培养基,加入一定浓度的刚果红溶液(果胶与刚果红结合后显红色),一段时间后洗去培养基表面的刚果红溶液,观察并比较菌落和_________直径的比值,筛选果胶酶高产菌株。

4)将获得的菌株进行液体培养后,从培养液的___________(填上清液沉淀物)获得粗提的果胶酶。将一定量的粗提果胶酶与适量果胶溶液混合,一定时间后测定吸光值来测定酶活性。进行吸光值测定时,需将____________与等量果胶溶液混合,作为实验的对照。

 

果胶和蒸馏水 高压蒸汽灭菌 梯度稀释(或系列稀释) (稀释)涂布平板 倒置 水解(或透明) 上清液 等量失活的粗提果胶酶 【解析】 分离果胶酶产生菌,应选择果胶为碳源的选择培养基,根据菌落直径与透明圈直径的大小选择高效分解果胶的菌株。 (1)该实验的目的是分离果胶酶产生菌,因此培养基中需要加入果胶,在配制过程中需用蒸馏水定容,所以该表空白处的两种成分是果胶和蒸馏水。制备的培养基常用高压蒸汽灭菌法进行灭菌。 (2)为获得较均匀分布的单菌落,还需要将悬液进行梯度稀释,并用稀释涂布平板法接种于固体培养基上。接种后的培养基倒置状态放入培养箱,以防止培养皿盖上凝结的水珠落入培养基造成污染。 (3)已知果胶与刚果红结合后显红色。果胶酶产生菌分泌的果胶酶能够将培养基中的果胶水解,当单菌落数目适宜的培养基中加入一定浓度的刚果红溶液一段时间后,洗去培养基表面的刚果红溶液,因菌落周围的果胶被分解,无法形成红色的复合物而出现水解透明圈,所以观察并比较菌落和水解(或透明)直径的比值,可筛选出果胶酶高产菌株。 (4) 将获得的菌株进行液体培养后,从培养液的上清液获得粗提的果胶酶。将一定量的粗提果胶酶与适量果胶溶液混合,一定时间后测定吸光值来测定酶活性。进行吸光值测定时,需将等量失活的粗提果胶酶与等量果胶溶液混合,作为实验的对照。  
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考点分析:
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改造生物的性状,在许多领域取得了可喜的成果。下图是利用奶牛乳汁生产人类血清白蛋白的图解,请据图分析回答:

⑴图中①一般经________处理可以得到③,在①→③的培养过程中,需向培养液中通入一定量的CO2,其目的是______________________________

⑵在胚胎发育过程中,囊胚时期的_________将发育成幼体的各种组织。

⑶在基因工程中,②表示_________________;②可用“DNA探针”进行筛选或检测,这里的“DNA探针”是指_______________;如果②的数量太少,常用_________技术来扩增。

⑷图中应用到的胚胎工程领域的生物技术有_____________________

 

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人肌红蛋白(Myo)是早期诊断急性心肌梗塞的生化标志物之一。为制备抗Myo的单克隆抗体,科研人员进行研究。

1)科研人员以Myo作为抗原免疫小鼠,取小鼠的脾脏细胞与________细胞诱导融合。用________培养基筛选融合细胞,得到杂交瘤细胞。

2)将得到的杂交瘤细胞接种到多孔培养板上,稀释、培养、再进行________检测并多次重复上述操作,多次重复该过程的目的是筛选获得抗Myo抗体产量大、纯度高的杂交瘤细胞。

3)双抗体夹心法是医学上常用的定量检测抗原的方法,具体原理如下图:

 

固相抗体和酶标抗体均能与抗原结合,这是由于不同抗体与同一抗原表面的________结合。该检测方法中,酶标抗体的作用是________________

4)研究人员获得三种抗Myo单克隆抗体,分别记为ABC。为检测它们之中哪两种适合用于双抗体夹心法,科研人员需要进行________组实验,检测并比较各组实验的________

 

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制备转基因克隆动物多是以易于核移植的胚胎成纤维细胞(EF)作为核供体。转入人生长激素基因的鼠胚胎成纤维细胞(tEF)不能分泌人生长激素,推测其不具备相应的细胞质条件而影响了基因表达,从而影响了对转基因细胞的筛选。为快速筛选出这类胞,研究者设计了如图所示的大致流程,据此回答问题:

 

1)生长激素的化学本质是________,杂合细胞可以分泌人生长激素,说明该细胞具备分泌生长激素的________条件。

2)这一分泌现象说明指导人生长激素合成的基因来自于________细胞,分泌生长激素的细胞质条件由________细胞提供。

3)培养和诱导融合等操作均需在严格的________环境条件下操作,且配制的合成培养基通常需要加入________等一些天然成分。

 

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紫杉醇是新型抗癌药物,能与细胞微管蛋白结合,具有促进微管聚合,抑制微管解聚的功能,从而起到抗癌作用。

1)细胞进行有丝分裂时需要微管聚合和解聚的正常动态平衡,从而在有丝分裂的________期染色体能够随微管解聚产生的拉力和微管聚合产生的推力,向两极移动。紫杉醇通过影响癌细胞在有丝分裂时________的形成,导致染色体数目异常,从而抑制了癌细胞分裂和增殖。

2)紫杉醇是红豆杉的细胞代谢产物,可从红豆杉中提取,但红豆杉生长十分缓慢,数量有限且紫杉醇含量非常低。因此,研究人员尝试运用现代生物技术获取紫杉醇。

①传统提取紫杉醇的过程中会产生大量废弃物,经研究发现酶A可将废弃物部分转化为紫杉醇,但酶A活性较低,研究人员成功获得能表达高活性酶A的目的基因,并利用基因工程技术导入________(大肠杆菌/酵母菌)细胞中,最终获得高活性酶A,从而提高紫杉醇转化量,选择该受体细胞的原因是________________

②研究人员欲通过植物组织培养获得紫杉醇,分别剪取曼地亚红豆杉和南方红豆杉的幼芽和嫩叶作为________,经过________过程形成愈伤组织,记录实验数据,计算出愈伤组织诱导率,如下图。

 

由上图可知,同一品种红豆杉以________(部位)作为实验材料愈伤组织的诱导率较高,这可能是因为________________________________________________。从实验数据可知,选择________作为实验材料并用________号培养基培养,更易获得愈伤组织,从而大量生产紫杉醇。

 

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萝卜的蛋白A具有广泛的抗植物病菌作用,而且对人体没有影响。我国科学家欲获得高效表达蛋白A的转基因大肠杆菌作为微生物农药,做了相关研究。

 

1)研究者用相同的________酶处理蛋白A基因和pET质粒,得到重组质粒,再将重组质粒置于经________处理的大肠杆菌细胞悬液中,获得转基因大肠杆菌。

2)检测发现,转入的蛋白A基因在大肠杆菌细胞中表达效率很低,研究者推测不同生物对密码子具有不同的偏好,因而设计了与蛋白A基因结合的两对引物(引物BC中都替换了一个碱基),并按图2方式依次进行4PCR扩增,以得到新的蛋白A基因。

①这是利用PCR技术实现了定点的________

②图2所示的4PCR应该分别如何选择图1中所示的引物?请填写以下表格(若选用该引物划“√”,若不选用该引物则划“×”)。

 

引物A

引物B

引物C

引物D

PCR1

 

 

 

 

PCR2

 

 

 

 

PCR3

 

 

 

 

PCR4

 

 

 

 

 

 

________

3)研究者进一步将含有新蛋白A基因的重组质粒和________分别导入大肠杆菌,提取培养液中的蛋白质,用________方法检测并比较三组受体菌蛋白A的表达产物,判断新蛋白A基因表达效率是否提高。为检测表达产物的生物活性,研究者将上述各组表达产物加入到长满了植物病菌的培养基上,培养一段时间后,比较________的大小,以确定表达产物的生物活性大小。

4)作为微生物农药,使用时常喷洒蛋白A基因的发酵产物而不是转蛋白A基因的大肠杆菌,其优点是________________

 

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