Question

转座子是指能从基因组的一个位置移动到另一个位置的 DNA 片段。Ac 片段能编码转座 酶，可自主移动。DS片段需在转座酶作用下，才可以从原来的位置上切离下来，然后随机 插入到所在染色体的其他位置或其他染色体上。

（1）用________酶将 DS片段构建在 Ti 质粒的T-DNA 片段上，再用含有该重组质粒的 ________转化水稻，自交筛选获得 DS-T-DNA纯合体（甲）。以同样方法获得Ac-T-DNA 纯合体水稻（乙）。

（2）甲、乙杂交获得 Ac/Ds 双因子转座系统水稻，在其后代中筛选到一些淡绿叶突变体。 利用淡绿叶突变体与野生型水稻（甲）进行系列杂交实验，________代获得野生型和 淡绿叶水稻植株分别为 442 株和 130 株，分离比符合3：1，初步推测淡绿叶突变是单 基因的________性突变。将 442 株野生型植株单株收获和播种，后代发生性状分离的 植株占________，则进一步确认上述推测。

（3）为进一步确定突变性状与 Ds 切离转座的相关性，设计 6 种引物（如图 1），对上述 572 株子代的 T-DNA 进行 Ds 转座的 PCR 检测。     

①检测原理：Ds 未发生切离的DNA位点，通过引物________可得到400 bp 的扩增产物；Ds 已发生切离的 DNA 位点通过引物________可得到 870 bp的扩增产物。

②扩增产物的电泳结果如图 2，据此判断________类型为淡绿叶突变体。       

若A 类型：B 类型：C 类型=_______，则突变性状产生与 Ds 片段的切离转座有关。

Answer

限制酶和DNA连接酶 农杆菌 子二(F2) 隐 2/3 b、d c、 d B 2:1:1

【解析】

根据题干信息分析，转座子是指能从基因组的一个位置移动到另一个位置的 DNA 片段，DS片段从原来的位置上切离下来需转座酶的作用。基因工程常用的工具酶是限制酶和DNA连接酶。将基因表达载体导入水稻细胞常用农杆菌转化法。

（1）将DS片段构建在Ti质粒的T-DNA片段上，需要先用限制酶切割，再用DNA连接酶连接，接着用含有重且质粒的农杆菌转化水稻，自交筛选获得DS-T-DNA纯合体（甲）。以同样方法获得Ac-T-DNA 纯合体水稻（乙）。

（2）根据题意分析，利用淡绿叶突变体与野生型水稻（甲）进行系列杂交实验，子一代为杂合子，子二代中出现性状分离，野生型和淡绿叶水稻植株分别为 442 株和 130 株，分离比接近3：1，符合一对等位基因的杂合子自交实验的性状分离比，说明淡绿叶突变是单基因的隐性突变。如果上述推测是正确的，则杂交后代中442 株野生型植株中纯合子：杂合子=1：2，将这442 株野生型植株单株收获和播种，只有杂合子自交后代会发生性状分离，即后代发生性状分离的植株占2/3。

（3）①检测原理：由于PCR扩增中子链是沿着引物的3，延伸，因此Ds 未发生切离的DNA位点，通过引物b、d可得到400 bp 的扩增产物；Ds 已发生切离的 DNA 位点通过引物c、d可得到 870 bp的扩增产物。

②扩增产物的电泳结果如图 2，据此判断B类型为淡绿叶突变体。

若A 类型：B 类型：C 类型=2：1：1，则突变性状产生与 Ds 片段的切离转座有关。