Question

某研究小组利用“滤膜法”对受污染的河流水体进行了大肠杆菌活菌数目的测定。回答下列问题：

(1)研究人员向葡萄糖蛋白胨培养液中加入适量的溴麝香草酚蓝水溶液后，装人图甲所示的试管中，再将污水样滴加进去振荡摇匀，一段时间后，若观察到溶液颜色变化情况为_________，，说明微生物在培养过程中产生了CO₂。若要用重铬酸钾检测微生物在培养过程中是否产生了酒精，具体做法是_________。

(2)利用图乙所示的“滤膜法”测定大肠杆菌的数目时，应先制备牛肉膏蛋白胨固体培养基，该培养基的灭菌方法是_________，灭菌后待培养基冷却至_________℃左右时，在_________附近倒平板。

(3)图乙中滤膜的孔径应_________(填“大于”“小于”或“等于”)大肠杆菌。若将滤膜转移到伊红美蓝培养基上培养一段时间，然后统计_________色的菌落数目，就可估算出单位体积样品中大肠杆菌的数目，但这样得到的统计值往往要比实际值低，原因是_________。

Answer

由蓝变绿再变黄 取2mL培养液的滤液注入干净的试管中，再向试管中滴加 0.5mL溶有重铬酸钾的浓硫酸溶液，振荡摇匀后规察溶液顔色的变化 高压蒸汽灭菌 50 酒精灯火焰 小于 黑 两个或多个大肠杆菌连在一起时，平板上只能观察到一个菌落

【解析】

二氧化碳可使溴麝香草酚蓝水溶液由蓝变绿再变黄，酒精可以使得重铬酸钾溶液由橙色变为灰绿色；伊红为酸性染料，美蓝为碱性染料，大肠杆菌在含有伊红美蓝培养基上形成的菌落呈深紫色（黑色），并有金属光泽，伊红-美蓝是专一鉴别大肠杆菌的指示剂；常用的纯化微生物时的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法。

（1）微生物细胞呼吸产生的CO2可使溴麝香草酚蓝水溶液由蓝变绿再变黄；微生物无氧呼吸产生的酒精可以用重铬酸钾进行检测，即取2mL培养液的滤液注入干净的试管中，再向试管中滴加 0.5mL溶有重铬酸钾的浓硫酸溶液，振荡摇匀后规察溶液顔色的变化。

（2）微生物培养基常用高压蒸汽灭菌法进行灭菌；待培养基冷却至50℃左右时，在酒精灯火焰附近进行倒平板。

（3）分析图解可知，实验将待测水样进行过滤，得到的滤膜进行微生物培养，因此水中的大肠杆菌应留在滤膜上，即图乙中滤膜的孔径应小于大肠杆菌；在伊红美蓝培养基上，可以鉴定出菌落为黑色的具有金属光泽的大肠杆菌菌落，因此该小组通过统计黑色菌落的数目，计算出单位体积样品中大肠杆菌数目。由于培养基中两个或多个大肠杆菌连在一起时，平板上只能观察到一个菌落，因此理论上他们的统计值比实际值偏低。