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图甲为构建重组质粒过程中的三种备选质粒,其中Ap为氨苄青霉素抗性基因,Tc为四环...

图甲为构建重组质粒过程中的三种备选质粒,其中Ap为氨苄青霉素抗性基因,Tc为四环素抗性基因。图乙为培育转AFPs基因(抗冻基因)番茄的示意图,外源DNA和质粒上均标出了酶切位点及相关抗性基因,请回答下列问题。

1)图甲中通常选用质粒C构建重组质粒,而不选用质粒A或质粒B,其中不用质粒A原因是____________________________________

2)据图乙分析,若需使用插入灭活法筛选并鉴定重组质粒,应优先选用限制酶_____切割目的基因和质粒。

3)从cDNA文库中获得的目的基因______(填“含有”或“不含有”)启动子和终止子。

4)在构建基因表达载体过程中常把两个启动子串联在一起形成双启动子,加在目的基因上游。双启动子作用是________________________

5)图乙农杆菌中的质粒应含有______,其作用是携带目的基因进入番茄细胞并整合到番茄细胞的染色体DNA。从分子水平检测AFPs基因是否成功表达的方法是_____________。若要获得抗冻能力更强的抗冻番茄,可以对AFPs基因进行改造,最终得到相应的蛋白质,该过程需用到______工程。

6)为使改造后的AFPs基因能够表达,人工设计质粒D并对它的多个酶切位点进行研究。若用HindⅢ酶或KpnⅠ酶单独切割质粒D,均获得一条长链,若用HindⅢ酶和EcoRⅠ酶同时切割,则获得2500bp12666bp片段,若用KpnⅠ酶和EcoRⅠ酶同时切割,则获得2250bp13166bp片段。若以HindⅢ酶切割位点为计算起点,则KpnⅠ酶切割位点与HindⅢ酶切割位点最短长度为_______EcoRⅠ酶的两个切割位点与HindⅢ切割位点的最短距离为_________

 

质粒A中没有标记基因,质粒B的复制原点中含有HindⅢ酶切位点 BamHⅠ和HindⅢ 不含有 保证目的基因的高效转录(高效表达) T-DNA 抗原-抗体杂交法 蛋白质 750bp 500bp 【解析】 基因工程技术的基本步骤: (1)目的基因的获取:方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。 (2)基因表达载体的构建:是基因工程的核心步骤,基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。 (3)将目的基因导入受体细胞:根据受体细胞不同,导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法;将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法;将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。 (4)目的基因的检测与鉴定:分子水平上的检测:①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术;②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术;③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定:抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。 (1)根据甲图分析,质粒A没有标记基因,质粒B的复制原点中含有限制酶HindⅢ切割位点,可能会破坏复制原点,而质粒C含有多个标记基因和酶切位点,适宜作为基因工程的载体。 (2)图乙中,选用的是质粒C作为基因工程的载体,结合目的基因两端的酶切位点,目的基因和载体可以选择BamHⅠ和HindⅢ同时切割,或者选择EcoRⅠ和HindⅢ同时切割,若需使用插入灭活法筛选并鉴定重组质粒,应优先选用限制酶BamHⅠ ( 会破坏Tc为四环素抗性基因)和HindⅢ切割,可以根据是否对四环素有抗性来筛选。 (3)从cDNA文库中获取的目的基因不含有启动子、终止子、内含子等。 (4)双启动子作用是保证目的基因的高效表达。 (5)农杆菌转化法中的Ti质粒含有的T-DNA可以携带目的基因进入番茄细胞并整台到番茄细胞的染色体DNA上;从分子水平检测AFPs基因是否成功表达的方法是抗原-抗体杂交法;对AFPs基因进行改造,进而达到改造获得抗冻能力更强的抗冻番茄,需要通过蛋白质工程实现。 (6)根据题意分析,若用HindⅢ酶或KpnⅠ酶单独切割质粒D,均获得一条长链,说明该质粒上只含有HindⅢ酶的一个酶切位点和KpnⅠ酶的一个酶切位点;若用HindⅢ酶和EcoRⅠ酶同时切割,则获得2个500b和1个2666bp片段,若用KpnⅠ酶和EcoRⅠ酶同时切割,则获得2个250bp和1个3166bp片段,说明EcoRⅠ酶有2个酶切位点,且两个位点之间的最短距离是500bp ,而KpnⅠ酶的切点在2个EcoRⅠ酶切点之间,距离每个EcoRⅠ酶切点250bp,HindⅢ酶切点距离最近的EcoRⅠ酶切点的最短距离是500bp,距离另一个EcoRⅠ酶切点的距离是500+ 500= 1000bp, 故KpnⅠ酶切割位点与HindⅢ酶切割位点最短长度为250+500= 750bp,EcoRⅠ酶的两个切割位点与HindⅢ切割位点的最短距离为500bp。
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考点分析:
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下图表示利用经抗原免疫后的B淋巴细胞与小鼠的骨髓瘤细胞进行杂交,制备单克隆抗体的过程。请据图回答下列问题:

1)在单克隆抗体的制备过程中,应用了细胞工程中的___________两大技术。

2)将特定的抗原注入小鼠,需在一定时间内间隔注射3次,其目的是______

3)培养杂交瘤细胞的培养基中需加入动物血清,原因是__________________;提供气体条件CO2的作用是______;杂交瘤细胞体外培养过程中,为避免细胞代谢产物积累对细胞自身造成危害,常采取的措施是_______________

4)对筛选出来的杂交瘤细胞应尽早进行克隆化,克隆化的方法最常用的是有限稀释法,即稀释细胞到310个细胞/mL,每孔加入细胞稀释液_________mL(填“01”“1”“10”),使每个孔内不多于一个细胞,达到单克隆培养的目的。

5)单克隆抗体注入体内后可以自动追踪抗原(如癌变细胞等)并与之结合,而不攻击正常细胞,故可制成“生物导弹”,这是利用了_________________________的原理,与传统从血清提取的抗体相比,单克隆抗体的优点是_______________

 

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某生物兴趣小组利用酵母菌开展相关探究实验。取AB两个锥形瓶,分别放入适量的等体积煮沸、冷却的质量分数为5%的葡萄糖溶液。A瓶接种一定量的酵母菌,B瓶不做处理,再将AB瓶放在相同且适宜的条件下培养。分析回答:  

1)将葡萄糖溶液煮沸的主要目的是_____________

2)该实验中使用的血球计数板有两个计数室(规格为:1 mm×1 mm×01 mm16中方格×25小方格)。有关叙述正确的有_________(填字母)。

a 一块盖玻片能同时覆盖两个计数室

b 活酵母菌可以被台盼蓝染液染成蓝色

c 先向计数室上滴加酵母菌培养液,再盖上盖玻片

d 视野中酵母菌存在抱团现象与取样前没有充分振荡、摇匀有关

3)为了方便酵母菌计数,培养后期的培养液应先_______再计数。该实验中A瓶的酵母菌数量估算值见下表:

时间(天)

1

2

3

4

5

6

7

酵母菌数量(万个/mL

32

180

256

257

258

192

 

 

 

 

2天观察计数时,发现计数室四个角上的4个中方格中共有36个酵母菌,其中被台盼蓝染液染成蓝色的有4个,则表中第2天酵母菌数量约为_______万个/mL。据表分析,酵母菌的种群数量相当一段时间内,呈______型增长。67天数量下降的原因可能有哪些_________________________________(至少两点),画出酵母菌的增长速率的曲线 ________

 

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下图1表示某种群数量变化可能的四种情况(“J”型、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ),其中a点后表示有外界因素引起的变化。图2是某生态系统能量流动部分图解(其中W1为生产者固定的太阳能)。请据图回答:

1)图1中曲线Ⅲ种群数量增长速率最快时,对应的种群数量为_________

2)若图1种群为长江流域生态系统中的白鳍豚,从种群特征上种群数量在a点以后发生曲线Ⅲ变化的直接原因是______________________。且种群数量为K3时,对白鳍豚种群保护的最有效措施是_____________________。对白鳍豚的科学研究体现了生物多样性的_________价值。

3)若图1种群为东亚飞蝗,干旱能抑制一种丝状菌(该菌造成蝗虫患病)的生长,a点若遇干旱,则a点后东亚飞蝗种群数量变化曲线可能为______(用图中标号表示)。

4 2中初级消费者粪便中能量属于______________;生产者中用于自身生长、发育、繁殖的能量可表示为_________。(都用图中字母表示)

5)图3表示该生态系统中三个物种123的环境容纳量和某时刻的种群实际大小。由图可知,物种_________的种内斗争最剧烈。

 

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Science杂志报道了一种叫做E·gall.的肠道细菌,它能够自发地转移到肠道外,进而引起相应的疾病,其致病机理如图1所示。请分析回答:

(1)E·gall.和人的种间关系最可能是________

(2)根据图1,E·gall.穿过肠道壁,突破了人体免疫的第________道防线,刺激________增殖分化为浆细胞并产生抗体,进而引发的狼疮性肾炎和抗磷脂综合征称为________病。说明该细菌表面与正常组织表面可能存在相似的________

(3)通过注射针对E·gall.的________类药物抑制组织中该细菌的生长,从而削弱其对免疫系统的不良影响。

(4)科学家分别提取未感染者体内细菌DNA、E·gall.疑似感染者(1—5)体内细菌DNA和E·gall.DNA,通过________技术对提取的DNA样品扩增后进行凝胶电泳分离,得到三种不同条带(如图2),据图分析,________号个体为E·gall.感染者。

 

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1为人体血糖浓度发生变化和受寒冷刺激后的部分调节过程示意图,AD表示激素。图2为人体激素的两种作用机制示意图。回答下列问题:

1)图1中受到寒冷刺激时,皮肤中的_______兴奋,引起皮肤血管收缩减少散热,同时激素_______(填字母)分泌量增多,机体代谢活动增强增加产热,此过程的调节方式为_____。激素B靶细胞是_________________

2 饮水不足、机体失水过多或吃的食物过咸会导致内环境的____________,下丘脑合成和分泌的相关激素增多,从而使肾小管、集合管对水分的重吸收能力增强,尿量减少。该激素只能作用于肾小管、集合管细胞根本原因是__________________

3)由图2可知,细胞膜上的蛋白质具有_______功能。血糖浓度降低时,促进胰岛内的_______细胞合成和分泌激素D,通过图2中的机制_____促进肝细胞内_____,从而升高血糖浓度。

 

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