Question

毒死蜱（C₉H₁₁C₁₃NO₃PS）是一种有机磷杀虫剂，长期使用将导致土壤中农药残留严重。某研究小组从长期施药的韭菜温室土壤（偏酸性）里分离出能降解毒死蜱的木霉，并对其降解特性进行初步研究。请回答：

（1）用于分离木霉菌种的培养基属于___培养基。配制此培养基时，应加入___作为唯一碳源。

（2）制备培养基的操作顺序是_____________________（用下列字母和箭头排序）

a．倒平板  b．计算  c．熔化  d．称量   e．灭菌

（3）接种前，将培养基在适宜温度下放置适当的时间，观察培养基______，以确定培养基是否被污染。

（4）为了统计木霉活菌的数目，应采用的方法是________，首先需将水样进行适当稀释，例如取水样 1 mL加入无菌水99mL 制备稀释倍数为10²的稀释液，并照此依次制备更高倍数的稀释液。整个过程中，都要在________操作。

Answer

选择 毒死蜱 b→d→c→e→a 是否产生菌落 稀释涂布平板法 酒精灯火焰附近

【解析】

微生物常见的接种的方法

①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。

②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。

其中，稀释涂布平板法可用于计数活菌。

（1）要分离出能降解毒死蜱的木霉，需要以毒死蜱作为唯一碳源培养基，在该培养基上只有能降解毒死蜱的木霉能生存，其它微生物都不能生存，因此该培养基属于选择培养基。

（2）制备培养基的操作顺序是计算→称量→溶化→灭菌→倒平板，即b→d→c→e→a。

（3）接种前，将培养基在适宜温度下放置适当的时间，观察培养基是否产生菌落，以确定培养基是否被污染。

（4）用稀释涂布平板法进行对微生物计数时，当样品的稀释度足够高时，培养基表面的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品大约含有多少活菌，首先需将水样进行适当稀释，例如取水样 1 mL加入无菌水99mL 制备稀释倍数为102的稀释液，并照此依次制备更高倍数的稀释液。为了防止杂菌污染，整个操作过程应进行无菌操作，所以应该在酒精灯火焰附近进行。