Question

菊天牛是菊花的主要害虫之一。科研人员将抗虫基因转入菊花，培育出抗虫菊花。下图是获得转基因菊花的技术流程，请据图回答：

注：卡那霉素抗性基因(Kan^r)作为标记基因，菊花叶片对卡那霉素高度敏感。

(1)为了促进土壤农杆菌吸收重组质粒，可用__________处理土壤农杆菌，使其处于感受态。

(2)将重组质粒导入土壤农杆菌的目的是利用农杆菌能够_________________________的特点，使目的基因进入受体细胞中，并插入到菊花细胞的________________上，最终形成转基因植株。

(3)将愈伤组织转移到添加一定浓度植物激素和________的培养基中，在适宜条件下进行培养，筛选转基因菊花。

(4)用PCR方法检测转基因菊花是否含有目的基因时，需根据____________________的核苷酸序列设计特异引物，以____________________为模板进行第一轮扩增。

(5)将转基因菊花嫩茎及叶片与人工饲料以适当比例混合后饲喂菊天牛2龄幼虫，实验结果如下表所示。

①对照组应饲喂等量的_____________________________。

②据表分析，________________________差异显著，说明转基因菊花对菊天牛2龄幼虫有较强的毒杀作用。

Answer

Ca2+（或“CaCl2”） 感染菊花（或“植物”）细胞，并将T-DNA转移至受体细胞 染色体DNA 卡那霉素 抗虫基因（目的基因） 转基因菊花的DNA（或“含目的基因的菊花DNA”） 非转基因菊花嫩茎及叶片与人工饲料混合物 实验组与对照组死亡率

【解析】

分析题图：图示为获得转基因菊花的技术流程图。目的基因（抗虫基因）和质粒构建基因表达；采用农杆菌转化法将目的基因导入受体细胞；再采用植物组织培养技术将受体细胞培养成转基因植株。

分析表格：实验组的死亡率明显高于对照组。

⑴通常用钙离子处理细菌，使之处于感受态。

⑵根据农杆菌的Ti质粒中的T—DNA可以整合到受体细胞的染色体DNA上的特点，通常用农杆菌转化法将目的基因导入受体细胞。

⑶基因表达载体的构建中，需要标记基因，根据题意可知该标记基因为卡那霉素，因此需要在加入卡那霉素的培养基中选择出成功转入目的基因的菊花。

⑷利用PCR技术扩增目的基因时，需要根据目的基因的脱氧核苷酸序列设计引物，同时利用含有目的基因的DNA为模板进行扩增。

⑸实验设计遵循对照原则，因此对照组应该加入非转基因菊花嫩茎及叶片与人工饲料混合物；根据实验组比对照组的死亡率高，说明转基因菊花对菊天牛2龄幼虫有较强的毒杀作用。