Question

某化工厂的污水池中，含有一种有害的、难于降解的有机化合物A。研究人员用化合物A、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制的培养基，成功地筛选到能高效降解化合物A的细菌(目的菌)实验的主要步骤如下图所示。请分析回答问题。

（1）接种前需要对培养基及培养皿等进行灭菌，常用的灭菌方法是____________。培养基灭菌后，将1mL水样稀释1000倍，在3个平板上用涂布法分别接入0．1mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为51、50和49。据此可得出每升水样中的活菌数为_________ 。

（2）实验需要振荡培养，由此推测“目的菌”的代谢类型是____________。

（3）培养若干天后，应选择培养瓶中化合物A含量________的培养液，接入新的培养液中连续培养，使“目的菌”的数量________。

（4）转为固体培养时，为获得单菌落进行继续筛选，常采用______________或____________法，接种后，应将培养皿________(填“正放”或“倒置”)

（5）实验结束时，使用过的培养基应该进行________处理后，才能倒掉。

（6）微生物的鉴定：为检测尿素分解菌的存在与否，在以尿素为唯一氮源的____________(填“选择”或“鉴别”)培养基中加入_____________指示剂，如果存在尿素分解菌，则指示剂将变___________色。

Answer

高压蒸汽灭菌法 5．0×108 异养需氧型 减少 增加 平板划线法 稀释涂布平板 倒置 灭菌 选择 酚红 红

【解析】

（1）实验室中目的菌株的筛选的原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。
（2）常用的接种方法有①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养，在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落；②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。

（1）接种前需要对培养基及培养皿等进行灭菌，常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌法；培养基灭菌后，将1mL水样稀释1000倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1mL稀释液，经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为51、50和49，据此可得出每升水样（1L=1000mL）中的活菌数=（51+50+49）/3×1000×10×1000=5.0×108。

（2）实验需要振荡培养，由此推测“目的菌”的代谢类型是异养需氧型。

（3）由于“目的菌”有降解有机化合物A的作用，所以培养若干天后，应选择培养瓶中化合物A含量减少的培养基；再接入新的培养液中连续培养，使“目的菌”的数量进一步增加。

（4）转为固体培养时，常采用平板划线法或稀释涂布平板法进行接种，分离获得单菌落；接种到固体培养基后，应将培养皿倒置培养。

（5）实验结束后，使用过的培养基应该进行灭菌处理后，才能倒掉，以杀死培养基上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。

（6）微生物的鉴定：为检测尿素分解菌的存在与否，在以尿素为唯一氮源的选择培养基中加入酚红指示剂，如果存在尿素分解菌，则指示剂将变红色。