Question

为了调查自来水的质量情况，某研究小组对自来水水样中的细菌含量进行了测定，请回答下列问题：

（1）用锥形瓶取水样前，可采用____法对锥形瓶灭菌。制备固体培养基的步骤是：计算、称量、溶化、灭菌、___ 。

（2）自来水水样需用____进行梯度稀释后再涂布平板，培养结果如图所示，推测该同学可能的操作失误是____。能据菌落数推测样品中的活菌数的原因是____。

（3）测定自来水中细菌的含量除采用上述方法外，还可以用____法对菌落数进行测定。为鉴别水样中大肠杆菌，培养基中还应加入的物质是____。

（4）经基因工程改造后的大肠杆菌可以生产出耐受性较好的碱性蛋白酶，目前可以采用固定化酶技术多次重复使用酶以降低成本。一般来说，酶更适合采用____法固定化。

Answer

高压蒸汽灭菌或干热灭菌 倒平板 无菌水 涂布平板时涂布不均匀 当样品的稀释度足够高时，一个菌落来源于样品稀释液中的一个活菌 滤膜 伊红美蓝 化学结合法和物理吸附法

【解析】

1、制备牛肉膏蛋白胨培养基的步骤是计算→称量→熔化→灭菌→倒平板。

2、稀释涂布法是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，在适宜条件下培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。

（1）在微生物的培养过程中，对锥形瓶灭菌可用高压蒸汽灭菌或干热灭菌。制备固体培养基的步骤是：计算、称量、溶化、灭菌、倒平板。

（2）为防止杂菌污染，自来水水样需用无菌水进行梯度稀释后再涂布平板。图中菌落分布不均匀，由此推测该同学接种时可能的操作失误是涂布不均匀。当样品的稀释度足够高时，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，经过培养，单个细胞可形成单个菌落，即一个菌落来源于样品稀释液中的一个活菌，所以可根据平板上的菌落数推测样品中的活菌数。

（3）测定自来水中细菌的含量还可以用滤膜法对菌落数进行测定。为鉴别水样中大肠杆菌，培养基中还应加入的物质是伊红美蓝，在该培养基上，大肠杆菌的菌落呈现黑色，可以根据培养基上黑色菌落的数目，计算出大肠杆菌的数量。

（4）由于酶分子较小，易从包埋材料中漏出，所以酶的固定化常用化学结合法和物理吸附法，而不用包埋法。