Question

以下是基因工程四个主要操作程序：

①基因表达载体的构建  ②将目的基因导入受体细胞       ③目的基因的获取  ④目的基因的检测与鉴定

请回答下列问题：

（1）进行③操作时，可以从基因文库中获取，基因文库分为_____________ 两种，其区别是_____________ ，PCR扩增也是获取目的基因常用的方法，进行PCR时，需要向扩增仪中加入热稳定DNA聚合酶、四种原料、_____________ 以及引物，合成引物的前提是_____________ 。PCR扩增时，与引物结合的是_____________ 。

（2）进行操作①时，应先选择合适的载体，常见的载体是质粒，质粒的本质是______；如图是常用的质粒载体，基因工程中利用BamH I限制酶识别CCATCC序列，并在GG之间切割，通过BamH I限制酶切割形成的末端属于___________，科研人员利用该质粒完成基因工程，则通过___________基因供重组DNA的鉴定与选择。

Answer

基因组文库和部分基因文库 基因组文库包含一种生物的全部基因而部分基因分库只包含该种生物的部分基因 模板DNA 有一段已知的目的基因核苷酸序列 目的基因DNA受热变性后解链成单链的相应互补序列 双链环状DNA分子 黏性末端 抗生素B抗性

【解析】

1、PCR的过程：①高温变性：DNA解旋过程；②低温复性：引物结合到互补链DNA上；③中温延伸：合成子链。PCR扩增中双链DNA解开不需要解旋酶，高温条件下氢键可自动解开。

2、基因文库是指将含有某种生物不同基因的DNA片段导入受体菌的群体中储存，这个受体菌群体称为基因文库。基因组文库包含某种生物所有的基因，部分基因文库包含某种生物的部分基因，如cDNA文库。

（1）基因文库分为基因组文库和部分基因文库两种，其区别是基因组文库包含一种生物的全部基因，而部分基因分库只包含该种生物的部分基因。PCR扩增目的基因时，需要向扩增仪中加入热稳定DNA聚合酶、四种原料、模板DNA以及两种引物。由于引物需要与DNA模板链互补，并引导子链合成，所以合成引物的前提是有一段已知的目的基因核苷酸序列。PCR扩增时，与引物结合的是目的基因DNA受热变性后解链成单链的相应互补序列。

（2）质粒是一种裸露的、结构简单、独立于细菌拟核之外，并具有自我复制能力的很小的双链环状DNA分子，故其本质是双链环状DNA分子；由于BamHI限制酶识别CCATCC序列，并在GG之间切割，可知通过BamHI限制酶切割形成的末端具有裸露的碱基，属于黏性末端。由于用BamHI限制酶切割质粒会破坏抗生素A抗性基因，所以科研人员利用该质粒完成基因工程时，通过抗生素B抗性基因供重组DNA的鉴定与选择。