Question

酵母的蛋白质含量可达自身干重的一半，可作为饲料蛋白的来源。有些酵母可以利用工业废甲醇作为碳源进行培养，这样既可减少污染又可降低生产成本。研究人员拟从土壤样品中分离该类酵母，并进行大量培养。如图所示为操作流程，请回答下列问题:

（1）配制培养基时，按照培养基配方准确称量各组分，将其溶解、定容后，调节培养基的_________， 及时对培养基进行分装，并进行_________灭菌。

（2）取步骤②中不同梯度的稀释液加入标记好的无菌培养皿中，在步骤③中，将温度约_______（填“25℃”、50℃”或“80℃”）的培养基倒入培养皿混匀，冷凝后倒置培养。

（3）挑取分离平板中长岀的单菌落，按步骤④所示进行划线。划线应注意的事项有________（答出两项给分）；步骤⑤中，为使酵母数量迅速增加，培养过程中需保证充足的营养和_________供应。

（4）若要对酵母细胞进行固定化处理，宜采用_________法，常用的固定化材料是_________， 该方法的优点是_________。

Answer

pH 高压蒸汽 50℃ 为保证无菌操作，接种环使用前都必须灭菌；每次划线结束后要进行灼烧；每一次在上一次划线结束处开始；划线时应避免划破培养基表面，以免不能形成正常菌落等 氧气 包埋 海藻酸钠（明胶、琼脂糖等均可） 成本低，操作更容易（酶活性不易受外界环境影响）

【解析】

据图分析，①称量土样，里面含有需要分离的酵母菌；②表示梯度稀释，③④表示平板划线法，进行纯化培养；⑥表示扩大培养，获得更多的酵母菌。

（1）配制培养基的操作步骤为称量→溶化→定容→调pH→分装→包扎→灭菌→倒平板，因此微生物的培养基配制好后应先调 pH，再分装。常见的灭菌方法有：高压蒸汽灭菌、干热灭菌、灼烧灭菌。培养基适宜用高压蒸汽灭菌法灭菌。

（2）待培养基冷却到 50℃左右时倒平板。

（3）在划线过程中，接种针、接种环使用前必须灭菌，以防止杂菌污染培养基；每次划线结束后要进行灼烧，以清除接种环上残留菌种；每一次在上一次划线结束处开始，为了保证接种环上的酵母菌来自于上一次划线末端，通过增加划线次数使每一次划线时的酵母菌数目逐渐减少，最终得到由单个细胞繁殖而来的菌落；划线时应避免划破培养基表面，大量酵母菌聚集，不能形成正常菌落。酵母菌的代谢类型是兼性厌氧型，有氧呼吸可以产生大量能量供酵母菌大量繁殖，所以需供氧使酵母数量迅速增加。

（4）因为细胞体积较大，宜用包埋法对细胞进行固定化处理。常用的固定化材料是海藻 酸钠、明胶、琼脂糖等。固定化细胞的优点是成本低，操作容易，酶活性不易受影响等。